油疗法对口腔细菌作用的生物膜模型

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1、油疗法对口腔细菌作用的生物膜模型摘要SroisiriThaweboon*JuraiNakaparksin**BoonyanitThaweboon**玛希隆大学口腔生物学院,牙医全体教员，泰国，曼谷目的：探讨油疗法作用的生物膜模型。材料和方法：油疗法对口腔微生物作用使用椰子油、玉米油、米糠油、棕榈油、芝麻油、葵花油和大豆油，在含有链球菌mutansKPSK2，乳酸菌caseiATCC6363和假丝酵母albicansATCC13803的唾液涂层的微量定量器上进行评价。盐水溶液和0.2％的葡萄糖酸氯溶液分别被用作阴性和阳性对照。结果：研究发现，椰子油具有对变形链球菌

2、和白色念珠菌的抗菌活性。芝麻油对变形链球菌有抗菌活性，而葵花籽油对白色念珠菌有抑菌活性。但是，经研究干酪乳杆菌对所有测试油具有抵抗能力。结论：目前的研究所得结果可作为科学证据，表明尤其是在发展中国家，一些食用油的油疗法可以在家庭预防治疗中被用作保持口腔卫生，治疗龋齿。引言龋齿是深入机体中的微生物聚合物和分泌唾液器官的细菌感染。龋齿的发生与微生物在牙齿表面和生物膜及牙龈上的增殖能力直接相关。生物膜的形成开始于自由浮动的微生物附着到一个面。这些首批入侵者为后来者提供了附着点和基体使生物膜聚合在一起。变形链球菌，乳酸杆菌属和白色念珠菌是牙龈中与龋损害相关的主要微生物[

3、1]。链球菌、变形链球菌和乳酸杆菌属被认为是龋齿起始和发展的关键，由于他们表现出的比其它的口腔细菌多产酸性和嗜酸性[2]。他们可以把膳食中的碳水化合物转换成酸，从而降低机体的pH值，并溶解牙釉的磷酸钙从而产生一个龋损。这些细菌引起的低pH条件打破了牙龈平衡，有利于念珠菌的扩散。油疗或油清洁是一个相关人员用油清洁或冲洗使口腔健康，有益于抑制龋齿，口腔异味，牙龈出血，咽喉干燥和嘴唇干裂的过程[3]。此外，据称这种简单的方法是治愈从血栓形成，湿疹，肠道感染，糖尿病，支气管炎和哮喘许多疾病[3]。这个过程是通常在每天刷牙前吮吸油，并将它在齿间留存1-10分钟。油将变得稀

4、薄和乳白色。这个过程应紧接着刷牙过程且最好在早上空腹时进行。科学证据表明，油疗法可以减少牙菌斑指数，缓解牙龈炎患者的牙龈刻痕和口腔中的细菌总数[4-5] 。此外，它可以使龋齿易感性从易感性轻微向中度感受性转变[6]。因此，本研究的目的是调查油疗法对口腔微生物效果的生物膜模型。材料与方法油     在本研究中使用的所有的油均是泰国产品，包括：椰子油（阿嬷草药大厦），玉米油（泰语公共蔬菜油公司），米糠油（泰国食用油公司），棕榈油（泰国公共蔬菜油公司），香油（阿嬷草药大厦），葵花籽油（李绍植物油）和大豆油（泰国公共植物油公司）。微生物    被测微生物来自于泰国玛希隆

5、大学牙医学院微生物学文化集合部。生物体如下：变形链球菌KPSK2，干酪乳杆菌ATCC6363白色念珠菌ATCC13803。他们被保存在5脑心浸液（BHI）琼脂（BBL，美国）上。细菌过夜培养是从培养基上取各个生物体的2-3增值体和约2毫升的制备穆勒韩丁肉汤（Difco公司，美国）接种。肉汤在37℃温育过夜。接种物是将过夜培养的细菌用生理盐水稀释成约10CFU/ml细菌液和10 CFU/ml的发酵。这些悬浮液将被用于抗菌测定。对生物膜模型的影响     油的效果评估是在微量滴定板的底部由变形链球菌KPSK2，干酪乳杆菌ATCC6363，白色念珠和菌ATCC1380

6、3组成的生物膜模型。生物膜检测使用由卢等人[7]和古根海姆博等人[8]的方法修订而来。简单地说，所有的微生物在液体巯基乙酸培养基培养（Difco公司，美国），7小时补充0.3％的葡萄糖。每个微生物悬浮液（10CFU/ml）被集中置于寒冷的温度下6小时。约60毫升的未激发的唾液由三个志愿者两个小时吃、喝或生理过程后收集而来。汇集唾液在以20,000g在4°C下离心30分钟。取该上清液用0.45mm的孔膜（德国，赛多利斯）过滤。通过血琼脂培养检验在此唾液中没有任何存活的微生物。室温下用96-聚苯乙烯吸收唾液成分到平底微量滴定板，4个小时后，获得培养薄膜。在去除多余的

7、唾液后，涂覆的微滴板接种上唾液混合物，培养基用巯基乙酸盐补充物、3％葡萄糖，和微生物共混。微量滴定板的接种物的最终密度为每个孔中105CFU/ml。然后，微孔板置于37°C、厌氧条件下培养二十四小时。用盐溶液和0.2％的葡萄糖酸氯己定溶液被分别作为阴性和阳性对照。将生物膜暴露于控制或供试油1分钟。在这期间，流体被上下拉动20次。然后，移除油和未连接的的细胞，将生物膜在PBS中洗涤三次，然后破碎和超声处理。将这一系列超声处理的稀释液，在缓症链球菌唾液杆菌肽琼脂（Difco公司，美国），RogosaSL琼脂（Difco公司，美国）和沙氏葡萄糖琼脂培养基（Difco公

8、司，美国）上培养，来分别