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1、黄曲霉真菌的生长抑制和拮抗研究经济学院统计090114号刘孟娟【摘要】：黄曲霉及其毒素危害巨大，是饲料食品中的主要污染源之一。乳酸菌作为益生菌，在食品防霉去毒的方法已获得应用，这是运用生物控制的一个成功范例；芽孢杆菌也已经可以从海洋生物中提取并应用于抑制黄曲霉真菌的生长；黑曲霉因为具有良好的分泌多种降解酶的能力，并且生产的酶制剂、有安全、可靠、不产生毒素的特点，是公认安全(GRAS)的微生物，也是科技工作者用生物控制方法来降解黄曲霉毒素的一种有效微生物。【关键词】：黄曲霉真菌乳酸菌芽孢杆菌黑曲霉生长抑制霉菌毒素污染造成全世界每年粮食的损失达数
2、千亿美元，而黄曲霉毒素因其对人、畜肝脏的剧烈损害而名列毒性之首，被列为极毒。黄曲霉菌(Aspergillusflavus)产生的黄曲霉毒素(aflatoxin)是目前发现的毒性和致癌性最强的化学物质之一，被世界卫生组织认定为1A级危险物(WHO，1993)。黄曲霉毒素(AFT)主要是粮油食品上常出现的黄曲霉(AspergilluflavasLink)和寄生曲(AspergillusParasiticasSpeave)产生的种具活性的、有毒的次级代谢产物。黄曲霉可通过产生孢子进行传播，侵染植物、植物产品各种食品和饲料等。它对农作物的产量，人、兽
3、和禽类的健康构成很大威胁。凡是含淀粉多的食品，如玉米、花生、大豆、大米、小麦、面粉等最易受到黄曲霉及其毒素的污染，果仁类也常受污染。因此采取何种措施来预防黄曲霉的生长与产毒是根本措施。目前的防霉措施是利用良好的农业生产工艺从田间防霉，在收获与保藏中采取防霉措施，此方法涉及多个步骤，操作起来较困难。此外，也有用化学防霉剂，多为化学合成物质，人们对其长期应用的安全性尚存疑虑。因此，对黄曲霉及其毒素的生物防治，目前国内外的研究方向主要是利用植物提取物和微生物的次生代谢产物来获得具有抗菌或降解毒素特性的物质。研究发现，多种植物提取物，如山苍子精油、百
4、里香油、海马齿香精油、玫瑰精油等对黄曲霉生长以及毒素的产生有较强抑制作用。目前发现能有效防治黄曲霉的微生物主要有乳酸菌、芽孢杆菌黑曲霉以及柠檬醛等。1、乳酸菌对黄曲霉真菌的生长抑制作用从健康动物体内分离抗黄曲霉活性的乳杆菌，不仅能添加在饲料中，起到生物防霉的作用，并且能在动物体内定植，为进一步研究开发饲料生物防霉剂提供菌种资源。应用于发酵乳制品中的乳酸菌种类非常多,能够抑制黄曲霉生长的只是少数。国内外对乳酸菌抗真菌的研究起步较晚,对乳酸菌抑制黄曲霉的研究主要集中在筛选对黄曲霉生长有抑制作用或能吸附黄曲霉毒素的乳酸菌菌种,研究分析乳酸菌在生长过
5、程中所产生的抗真菌代谢产物,乳酸菌抑制黄曲霉毒素的合成,以及结合或降解黄曲霉毒素的作用。在已知的研究中,某些植物乳酸杆菌表现出很好的抗黄曲霉效果,如Lavermicocca等(2000)研究发现,植物乳酸杆菌菌株21B在小麦面粉水解产物中培养后,离心获得的上清液几乎能完全抑制包括黄曲霉FTDC3226在内的十几种真菌的生长。筛选有抑制霉菌活性的乳酸杆菌,其应用于动物的保健和治疗中可以带来可观的应用前景。乳酸杆菌抗霉菌活性的应用有很多途径,比如将菌种添加到动物饲料中,同时发挥乳酸杆菌代谢物保鲜及抗霉菌污染作用,延长饲料的保存期;筛选容易在动物体
6、内定植的抑霉菌乳酸杆菌,使其在动物体内发挥抗病原菌繁殖和霉菌毒素吸收作用。马静等(2003)研究发现,乳酸杆菌可以减少人体肠道对黄曲霉毒素吸收,增加其排泄。依据这一点可以将乳酸杆菌应用于霉菌毒素慢性中毒的预防和治疗。从动物粪样中筛选出对黄曲霉有较强抑制效果的两株乳酸杆菌,并鉴定为植物乳酸杆菌,为抗真菌乳酸杆菌在动物生产上的应用提供了菌种资源。乳酸杆菌全菌液的抑制效果比乳酸杆菌上清液更好，原因可能是：除乳酸杆菌全菌液中本身含乳酸和一些抑菌代谢产物形成抑菌现象外，乳酸杆菌细胞在被接种到PDA培养基中后与霉菌间产生了多因素拮抗作用，另外，乳酸杆菌代
7、谢过程中会产生大量的乳酸，使环境中的pH值降低，抑制黄曲霉生长。乳酸所形成的低pH环境有降低黄曲霉孢子萌发率的作用，但接种了乳酸杆菌的处理组表现出更明显的抑制作用。这说明，对黄曲霉孢子萌发抑制作用的产生不仅在于低pH环境的影响，还有乳酸杆菌代谢产物和微生物间互相拮抗等多因素同作用的结果。2、芽孢杆菌抑制黄曲霉生长海洋巨大芽孢杆菌对黄曲霉菌丝延长有抑制作用；随着巨大芽孢杆菌菌数的增加,黄曲霉孢子的萌发率显著降低孢子萌发程度显著减弱；高浓度细胞溶液对黄曲霉孢子萌发和菌丝延长也显著的抑制作用；由此可见海洋巨大芽孢杆菌是通过竞争性生长和产生某种次级代
8、谢产物来抑制黄曲霉孢子的萌发和菌丝的延长。海洋巨大芽孢杆菌能极显著地抑制黄曲霉产黄曲霉毒素(P<0.01),抑制率可达50.75%.越来越多的研究表明,黄曲霉的次级
