2016_2017学年高中生物第1章无菌操作技术实践第2节分离特定的微生物并测定其数量学案苏教版

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1、第二节　分离特定的微生物并测定其数量1．认识各种微生物形成的菌落特征。2．学会利用涂布平板法分离、培养微生物，并测定其数量。(重难点)3．掌握利用选择培养基分离特定微生物的方法。(重点)微生物的分离1．分离原理在实验室中利用选择培养基可以筛选和分离出某种微生物，然后在高度稀释的条件下，在固体培养基上培养该微生物形成的单个菌落，即为纯培养物。2．分离方法(1)平板分离法：包括涂布平板法和混合平板法。能将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面，每个孤立的活微生物体经过生长、繁殖均可形成单个菌落。(2)选择培养

2、分离：科学家针对某种微生物的特性，设计一个特定的环境，使之特别适合这种微生物的生长，而抑制其他微生物的生长。这种通过选择培养进行微生物纯培养分离的技术，称为选择培养分离。(3)根据菌落特征初步分离：①菌落的含义：是指单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度，形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。②菌落特征：不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落一般都具有稳定的特征，如菌落的大小、形状、边缘特征、隆起程度、颜色等，这些可以成为对微生物进行分类、鉴定的重要依据。[合作探讨]探讨1：在琼

3、脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌吗？提示：标准的单个菌落中只含有一种细菌。探讨2：如果要分离厌氧菌，应在什么条件下培养？提示：在无氧条件下培养。探讨3：在选择培养分离微生物的过程中，“选择培养”的培养基按物理性质划分属于什么培养基？为什么？提示：固体培养基。便于选择、分离所需要的微生物。[思维升华]1．涂布平板法与混合平板法的比较比较操作特点结果涂布平板法取一定稀释度的样品涂布平板↓用无菌玻璃刮铲将样品涂布均匀先制作琼脂平板后加入菌液细菌菌落通常仅在平板表面生长混合平板法取一定稀释度的样品与熔化的琼脂

4、混合↓将与样品混合后的琼脂倒入无菌培养皿菌液与琼脂混合，共同倒平板细菌菌落出现在平板表面及内部2.选择培养基的选择作用(1)原理：根据不同微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性不同而制备培养基。(2)方法：①在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。②改变培养基中的营养成分。例如，缺乏氮源时可以分离固氮微生物；石油作为唯一碳源时，可以分离出能消除石油污染的微生物；用含无机碳源的培养基分离自养型微生物。③改变微生物的培养条件。例如，将培

5、养基放在高温环境中培养可以得到耐高温的微生物；用普通培养基在无氧条件下分离厌氧型和兼性厌氧型微生物。1．微生物的接种方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，关于两者的区别下列说法正确的是(　　)比较方面平板划线法稀释涂布平板法①需在无菌条件下操作不需无菌操作②培养基中不加琼脂培养基中加有琼脂③不可计算菌液中的活菌数可计算菌液中的活菌数④需要接种环需要玻璃刮铲A.②、④　　　　　　B．③、④C．①、④D．②、③【解析】　平板划线法和稀释涂布平板法都需要进行无菌操作，避免杂菌污染；平板划线法和稀释涂布平板法都使

6、用固体培养基，培养基中都加有琼脂；平板划线法采用接种环或接种针进行接种，而稀释涂布平板法采用玻璃刮铲进行接种；稀释涂布平板法可计算菌液中的活菌数，平板划线法不能计算出菌液中的活菌数。【答案】　B2．下面是本课题将用到的培养基配方，请根据下表回答下面的问题：【导学号：67850009】编号成分含量①KH2PO41.4g②Na2HPO42.1g③MgSO4·7H2O0.2g④葡萄糖10.0g⑤尿素1.0g⑥琼脂15.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL(1)在该培养基的配方中，为微生物提供碳源的是__

7、______，提供氮源的是________。(2)绝大多数微生物都能利用________，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解________。(3)分析该培养基的配方，该培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，又是如何进行选择的？【解析】　碳源是提供碳元素的物质，氮源是提供氮元素的物质。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以这种培养基对微生物有选择作用。选择的原则是只有能够利用尿素的微生物才能够生长。【答案】　(1)葡萄糖　尿素(2)葡萄

8、糖　尿素(3)具有。以尿素为唯一氮源的培养基可以分离到产生脲酶的微生物(即分解尿素的微生物)。土壤微生物的分离、培养与数量测定1．涂布平板法培养和计数土壤微生物(1)过程：(2)计数：每克土壤样品的细菌数＝某一稀释度几次重复培养后的菌落平均数×稀释倍数(涂布所用稀释液为1mL)2．显微镜直接计数法(1)原理：利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。(2)血球计数板：血球计数板是一