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1、实用标准文案分子荧光光谱分析法高乃群1.引言荧光分析法灵敏度高(比紫外可见光度法高2~3个数量级),选择性好,且工作曲线线性范围宽,能提供激发光谱、发射光谱、发光强度、发光寿命、量子产率、偏娠和各向异性诸多信息等优点，已成为一种重要的痕量分析技术.在生物、医学、药物、环境、石油工业等诸多领域有广泛应用.不仅能直接、间接地分析众多的有机化合物。利用与有机试剂间的反府还能进行许多元机元素的测定.随着科学技术的迅速发展，激光、微机、电子学等新技术等新技术的引入,大大推动了荧光分析技术在理论上的发展.，促进了诸如时
2、间分辨、相分辨,荧光偏振、荧光免疫、同步获光、三维荧光技术和荧光光纤化学传感器、荧光光纤免疫传感器等荧光分析新方法与新技术的发展,同时促使各种各样新型荧光分析仪器的出现.2.方法原理处于基态的分子在吸收适当能量(光能、电能、化学能、生物能等)后，其价电子从成键轨道或非键轨道跃迁到反键轨道上去，这就是分子激发态产生的本质。激发态不稳定．将很快衰变到基态。激发态在返回基态时常伴随光子的辐射，这种现象称为发光。荧光属于分子的光致发光现象,光物理过程可用Jablonski图解说明.基态分子吸收光能受激后,处于Sn的
3、分子．通过振动驰豫精彩文档实用标准文案(VR)和内转换(IC)过程失活到S1态的最低振动能级。若时伴随着光子的发射返回到S0的各振动能级,即S1→S0跃迁过程得到荧光，此过程发射光子的能量．即荧光发射波长,对应于S1态最低振动能层与基态S0各振动能层之间的能量差。荧光过程的单线态单线态跃迁中，受激电子的自旋状态不发生变化。若处于S1态的分子基于自旋—轨道耦合作用，通过系间窜跃(ISC)过程(内、外重原子存在有助于此系间窜跃过程，称重原子效应)，由单线态的S1态转入三线态的T1态,继而通过VR过程弛豫到T1态
4、的最低振功能层．再通过光辐射过程回到S1各振动能层,则得到磷光。显然，磷光波长要长于荧光波长.在一定光源强度下，若保持激发波长不变，扫描得到的荧光强度与发射波长的关系曲线，称为荧光发射光谱.精彩文档实用标准文案反之．若保持不变．扫描得到的荧扫描得到的荧光强度与的关系曲线，则称为荧光激发光谱，对低浓度溶液样品而言，一定和条件下测得的荧光强度可表示为式中，为荧光量子产率为激发光强度，b为激发光强度，c分别为发光物质的摩尔吸光系数和摩尔浓度,由此可见,只要发光物质的浓度不是太大在一定条件下，其荧光强度与其浓度成正
5、比.这就是荧光的定量分析基础.1.仪器结构与原理一般的荧光分光光度计与紫外可见分光光度计类似,由光源、单色器、样品室、光电倍增管和读出(记录)装置所组成,但光源不同。多采用高压汞灯、氙灯和激光光源.精彩文档实用标准文案同时。旋光测量多采用激发光和发射光成直角的光路，仪器组件的布置有所不同。其结构后面王阳同学会仔细讲到,在此不赘述.下面介绍几种分子荧光荧光的具体应用原理.实验原理:在紫外光照射下，本身能发射荧光的无机化合物很少,无机化合物的荧光分析主要依赖于待测元素与有机试剂形成配合物的反应.桑色素是一种重要
6、的荧光试剂，它本身在时呈弱绿色荧光,—旦与金属离于配位,荧光大大增强.可用于和以及稀土元素等离子的测定.条件下,桑色素可与)形成荧光性配合物精彩文档实用标准文案,若同时存在阴离子表面活性剂SDS胶束,则该体系课发出很强的荧光.用与钪的测定.该法可用于痕量钪.胶束增敏荧光足—种普遍存在的现象．但不问荧光体系对各种表面活性剂有选择性的要求，其增敏机理也有行进—步深入探讨。表面活性剂分于是一种双亲分子。由极性头基和疏水的非极性烃链组成，当表面活性剂浓度很低时．它们以单体形式分散存在于溶液中．一旦浓度超过最低浓度,
7、，则自发地聚集成胶束。胶束对荧光质点具有增溶、增敏和增稳等作用。胶束溶液中荧光的明显增强。主要是因胶农的存在改变了溶剂的诸如极性、粘度、介电常数等若干微观性质,以及胶束对各种光物理过程速率的影响,其净的结果是提供了对激发单线态的一种保护性环境.荧光质点被分散和联结于胶束中，流动性更小了。从而得到了很有效的屏蔽.这种保护性的环境降低了荧光质点自身浓度猝灭和外部猝灭剂的淬灭作用．提高了发光量子产率.亚硝酸盐是食品、环保、纺织及电镀等工业中重要的分析项目之一。亚硝酸盐可能于蛋白质分解产物仲胺类物质结合．生成致癌物
8、质亚硝胺，食品中亚硝酸盐含量必须控制在一个很低的水平,亚硝酸盐本身无荧光，不能用荧光法直接测定。衍生荧光法借助一定精彩文档实用标准文案的化学反应，可以测定那些本身不发荧光的物质．亦可通过衍生反应，改变被测组分的化学组成和结构，借助于发光特性(波长和强度等)的改变,提高测量的选择性和灵敏度.酸性介质中，亚硝酸根能与过量4-羟基香豆素迅速反应形成低荧光性的亚硝基衍生物,该产物经还原为3—氨基4-羟基香豆素后,在碱性介
