细胞生长曲线绘制实验报告

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划细胞生长曲线绘制实验报告　　MTT法测定细胞生长曲线　　1、取生长状况良好的细胞，常规消化制成单细胞悬液并计数，调整细胞成六个浓度梯度，依次为：5x10、1x10、2x10、3x10、4x10、5x10/ml，均匀接种细胞于96孔细胞培养板，每孔加细胞悬。　　液200ul，每个浓度组设6个复孔,共接种7块培养板，37℃、5%C02浓度，饱和湿度培养箱中连续孵育24/48/72/96/120/148/172小时后。　　2、每孔加入

2、20ulMTT溶液(smg/m1用PBS配)，继续孵育4h后终止培养。　　3、快速翻转培养板,弃去上清液,每孔加入150ulDMSO,振荡10min，使MTT蓝紫色结晶完全溶解。　　4、用酶联免疫检测仪于490nm处检测各孔的吸光值(OD值)，并以未接种细胞只加培养基孔的吸光值为空白对照调零，取6孔平均值。　　5、实验重复3次，以培养“时间”为横轴，“吸光值”为纵轴绘制细胞生长曲线。　　细胞生长曲线的测定　　1．取生长良好接近汇合的细胞，用胰酶消化，用新培养基制成细胞悬液后计数(见目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行

3、业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　四、细胞传代培养的实验步骤)。如是非粘壁细胞，则离心弃旧培养基后，换上一定量的新鲜培养基然后制成细胞悬液计数。　　2．根据细胞计数结果按每个小方瓶5×104／mL作传代培养接种细胞，共接种21瓶细胞。　　3．24h后开始计数细胞，以后每隔24h计数一次，每次取3瓶细胞，分别进行计数。计算平均值。连续计数7d。　　4．根据细胞计数结果，以单位细胞数(细胞数／m

4、L)为纵坐标，以时间为横坐标绘制生长曲线。(细胞计数方法请参照实验三)　　(二)细胞生长曲线测定(MTT法)1．制备1mL细胞悬液。空白对照以1mL培养基代替细胞悬液。加入0．1mLMTT于37℃孵育4h。使MTT还原为蓝紫色甲月赞结晶。　　2．加1mLDTW脱色液，37℃至少静置30min(甚至过液)，使甲质颗粒充分溶解。　　3．吸取200μL该溶解液至96孔板孔中，在酶标仪上读取OD值，检测波长570nm，参考波长630nm。　　4．每隔24h测量一个点，每个点为3个平行样品的平均值。　　细胞蛋白电泳　　一.细胞总蛋白抽提细胞裂解

5、液目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　三去污裂解液:50mmol/LTris-cl(pH)，150mmol/LNaCl，g/L叠氮钠，1g/LSDS，100mg/LAprotin，10g/LNP-40，5g/L去氧胆酸钠，100mg/L苯甲基磺酰氟(PMSF)　　　　总蛋白抽提程序：　　洗细胞3次　　2.加入裂解缓冲液，冰上放置

6、20min　　3.收集裂解液　　4.离心，1XX转，2~10min　　5.吸取上清，蛋白定量，分装，保存在-78度备用。　　试剂：　　1.30%聚丙烯酰胺：29g丙烯酰胺，1gN,N'-亚甲双丙烯酰胺，100ml水，滤膜过滤，棕色瓶，室温保存　　2.10%过硫酸铵：1g过硫酸铵，10ml水，4℃保存　　3.10%SDS：100gSDS，1000ml水，68℃助溶，pH　　4.TEMED：lmlTEMED，99ml水，棕色瓶，4℃保存　　5.5XTirs-甘氨酸电泳缓冲液：Tirs碱，94g甘氨酸，50ml1(来自:写论文网:细胞生长曲线绘

7、制实验报告)0%SDS，1000ml水，使用时配制成1X　　【操作步骤】　　l.将电泳槽玻璃板洗净，吹干，安装好；　　2.用1％的琼脂糖电泳缓冲液封严玻璃板的边和底；目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　3.配分离胶，将配好的分离胶立即倒入凝胶槽内，至凝胶槽高三分之二处，加入蒸馏水密封。待胶凝固后，约需30min，倒掉水，用吸水纸吸干；　

8、　4.配浓缩胶，将配好的浓缩胶立即倒入凝胶槽内，插入梳子；　　5.待胶凝固后，拔出梳子，加入电泳缓冲液：　　6.样品处理：取标准蛋白或样品20μl，加入20μl样品缓冲液，混匀，100℃水浴加