文献检索综述：活载体疫苗

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1、文献检索综述：活载体疫苗王文昊092300016摘要：用基因工程的方法对细菌和病毒进行改造，使之成为活体重组疫苗(1iverecombinantvaccine)。这种活体重组疫苗可以是非致病性微生物通过基因工程的方法使之携带并表达某种特定病原物的抗原决定簇基因，产生免疫原性；也可以是致病性微生物通过基因工程的方法修饰或去掉毒性基因以后，仍保持免疫原性。在这种疫苗中，抗原决定簇的构象与致病性病原体抗原的构象相同或者非常相似。活载体疫苗克服了常规疫苗的缺点，兼有死疫苗和活疫苗的优点，在免疫效力上很有优势。关键词：活载体疫苗非

2、致病性微生物抗原决定簇基因基因重组以病毒和细菌为载体的活载体疫苗是疫苗研究领域的一大发展趋势，其原理是将外源的目的基因插入已有的病毒或细菌疫苗株基因组或其质粒的某些部位使之高效表达，但不影响该疫苗株的生存与繁殖。接种这种疫苗后，除对原来的病毒（或细菌）的保护之外，还获得对插入基因相关疾病的保护力。[1]利用对动物无致病性或致病性很弱的病毒作载体，将外源性基因(通常是其它病原微生物的主要保护性抗原蛋白基因)及启动子调控序列插入其中的非必需区(非编码区)，再通过病毒同源重组技术，获得重组病毒。利用该重组病毒接种动物后，不仅诱

3、导机体产生针对异源性病毒的特异性免疫反应，而且在采用宿主特异性载体病毒时，能够使宿主获得针对与载体病毒相应的强毒株的免疫力。如果在载体病毒中同时插人多个异源性病毒的保护性抗原基因就可以达到一针防多病的目的。以此重组病毒作为基因工程活载体疫苗，可同时启动机体细胞免疫和体液免疫，避免了灭活疫苗的缺陷，又无常规疫苗毒力反祖之虞，尤为重要的是可以同时构成多价乃至多联疫苗，使之成为近几年来新型疫苗研制最为活跃也最有希望的领域。现已构建出痘病毒、疱疹病毒、腺病毒和肠病毒的活载体及大肠杆菌、沙门氏杆菌和卡介苗的活载体，其中以痘病毒活载

4、体疫苗研究较多。[2]1病毒活载体疫苗这类疫苗以某种非致病性病毒(株)或细菌为载体来携带并表达其他致病性病毒或细菌的保护性免疫抗原基因。1.1I型牛疱疹病毒I型牛疱疹病毒为α-疱疹病毒，是牛传染性鼻气管炎(IBR)的病原，能够引起牛的呼吸道疾病、繁殖道损害、流产甚至致死性系统感染。1.1.1I型牛疱疹病毒基因组结构与其它疱疹病毒类似，BHV一1基因组为双股线性DNA，长150kb左右，预计含有约70个编码基因，其中有20％是非必需基因，如TK，Ge，gc等，可容纳多个外源基因的插人；[3]另外，BHV一1的宿主范围窄，牛

5、是本病毒自然感染的唯一宿主，更重要的是它不感染人，因而，其重组病毒的使用不会产生流行病学方面的不良后果；又加上BHV一1弱毒活疫苗株已经存在并已多年安全地使用于牛。据此，用BHV一1弱毒株作为活载体疫苗载体来控制牛病将成为可能。1.1.2I型牛疱疹病毒活载体疫苗的构建BHV一1活载体疫苗的构建首先要建立一个包括启动子和外源基因的转移载体质粒，其两侧为BHV一1特异的DNA序列，然后将此质粒导人BHV一1感染的细胞中，BHV一1病毒DNA与质粒中的同源序列在细胞内可发生同源重组，由此将外源基因组装到BHV一1病毒组的特定部

6、位，构建出重组BHV一1病毒。外源基因应插入到病毒基因组中对病毒复制非必需的区域，因此，非必需区的克隆和筛选是病毒活载体构建的先决条件。TK是病毒复制的非必需基因，而且也是仅一疱疹病毒亚科的一个毒力基因，BHV一1的4个不同毒株TK基因已被克隆并测序；gC基因也称GVP一9，编码糖蛋白gc，对病毒复制也是非必需的。通过缺失TK或gc等基因的缺失均可使病毒的毒力减弱。另外在病毒载体构建时，还应考虑外源基因表达的调控元件，包括启动子、增强子、起始密码子和终止密码子等，其中最重要的是启动子。可供选择的启动子较多，如SV40、C

7、MV等许多真核启动子均可启动外源基因在疱疹病毒感染细胞中的表达。一般地，外源基因的起始密码子距启动子越近，外源基因的表达效果越好。在筛选方法上，可用TK病毒感染表型为TK一的细胞系后，将重组转移载体质粒转染该细胞，在受染细胞发生TK同源重组而形成TK一并带有外源基因的重组病毒。在培养液中加入5一溴尿嘧啶脱氧核苷(BudR)，TK+病毒不能存活，只有TK一重组病毒能增殖并形成蚀斑，将蚀斑挑出，用核酸针检测重组病毒是否带有外源基因。但是，最常用的筛选方法，是在转移载体中再插入Lacz报告基因盒，用作筛选标志，在含有x一鼬l的

8、培养基中可方便地挑选出蓝色的重组病毒。[2]1.2火鸡疱疹病毒(HVT)火鸡疱疹病毒作为载体具有可容纳较大的外源基因，并能对外源基因正确表达后进行修饰，使其保持原有的感染性等优点。因而以HVT为载体的基因工程疫苗的研究具有广阔的应用前景。1.2.1火鸡疱疹病毒的构建用RT-PCR方法扩增了禽流感病毒A/goose/G