不同方法分离人脐血造血细胞的比较研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果不同方法分离人脐血造血细胞的比较研究【摘要】　　目的：比较不同方法分离人脐血造血细胞的回收率。方法：分别用甲基纤维素、明胶、羟乙基淀粉、红细胞裂解液分离脐血造血细胞，计算有核细胞回收率。Giemsa染色计算单个核细胞百分率。结果：4种方法分离后回收率分别为%、%、%、%。结论：4种方法效果均较好，其中以明胶分离效果最佳。【关键词】人脐血造血细胞甲基纤维素红细胞裂解液明胶分离脐血中含有丰富的造血干细胞，是

2、在造血干细胞移植中除骨髓、外周血外理想的造血干细胞来源。脐血采集方便，来源丰富。研究表明，脐血单个核细胞扩增后，细胞免疫活性仍低于成人外周血［1］。我们采用不同方法分离脐血造血细胞并比较其回收率，以期找到最佳的分离造血细胞的方法。1材料与方法材料血样来源于长春市妇产医院。要求：无急、慢性感染及血液系统疾病，非高危妊娠产妇，足月顺产。脐血采集后，4℃保存，不超过2h。甲基纤维素、明胶Sigma分离。羟乙基淀粉Sigma原装进口。方法(1)6份脐血平均血量70～80mL。取脐血40mL，平均分成4等份，每份10课题份量和难易程度要恰当，博

3、士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果mL。计算总有核细胞(TNC)数。(2)取1份10mL脐血加入40mL红细胞裂解液(本室自制)，室温放置10min，1000r/min,离心10min，去上清，再加入红细胞裂解液离心，去上清。生理盐水洗1遍。(3)余下3份脐血均加入等量生理盐水稀释后，分别加入mL1%甲基纤维素、20mL%明胶、mL%羟乙基淀粉(均经37

4、℃预热)，充分混匀，室温沉降30～4min，吸出上部血浆层，生理盐水洗1遍。(4)上述获得的细胞计数后涂片，室温干燥，Giemsa染色，计算单个核细胞百分率。有核细胞回收率＝分离后有核细胞数/分离前有核细胞数×100%；单个核细胞百分率＝分离后单个核细胞数/分离后有核细胞数×100%。结果.1各种不同方法分离脐血造血细胞后有核细胞回收率比较见表1。.2结果有核细胞回收后单个核细胞百分率均在90%左右，4种方法无显著差别。表1不同分离脐血造血细胞后有核细胞数讨论　课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结

5、果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果　　随着人类造血细胞培养技术的建立，70年代发现，与骨髓相比，脐血中有较多含量的更原始、能重建长期造血的干/祖细胞，具有更强的增殖分化能力。90年代初用脐血代替骨骼作为造血干细胞移植取得成功，使脐血干细胞移植的研究与应用进入一个新阶段。而应用脐血的重要基础手段是脐血中造血干细胞的分离浓集。分离脐血细胞的方法很多［2］，有报道采用羟乙基淀粉2次沉淀法分离脐血造血细胞，

6、回收率高、操作简便、污染机会少［34］。我们采用4种不同方法分离脐血造血细胞均获得较好的分离效果。【参考文献】　　［1］邱莲女,周永列,夏小华,等.人脐血造血细胞扩增后表面标志的动态研究［J］.中华血液学杂志,XX,21(8):409.　　［2］龚守良.实用基础医学实验技术［M］.长春:吉林科学技术出版社,1991:8386.　　［3］张洪泉,傅增矩,沈柏均,等.脐血造血细胞的分离与保存［J］.中华血液学杂志,1992,13(4):182183.　　［4］马庆.人脐血中造血细胞的分离、浓缩和保存［J］.中国输血杂志,XX,13(

7、2):9192.课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。