牛膝药理血清对血管内皮细胞影响的实验研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果牛膝药理血清对血管内皮细胞影响的实验研究作者：韦倩，盖国忠，伊鹏菲，王帅玉【摘要】目的:研究牛膝药理血清对血管内皮细胞(VEC)增殖的影响和对脂多糖(LPS)所致血管内皮损伤的预防和修复作用。方法:给Wistar大鼠灌服牛膝醇提物后取其血清加至单层培养的VEC细胞中观察VEC的形态及功能变化。结果：牛膝药理血清能够促进血管内皮细胞的增殖，能够对细胞起到保护作用，有效预防脂多糖对其的损伤。结论：本课题为牛膝对

2、高血压病预防作用的深入研究奠定了基础。【关键词】高血压病；血清学；药理学；牛膝；大鼠基金项目:吉林省科技厅、吉林省杰出青年科学研究计划项目(编号5-28-219)　　近年来研究表明［1］,牛膝有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗衰老、镇痛抗炎、子宫兴奋及抗生育和抗凝血的作用。在已证明牛膝煎液有降低原发性高血压大鼠血压作用的基础上，为进一步研究牛膝的降压机理，笔者给大鼠灌服牛膝提取液一定时间后，收集其血清进行实验，观察单味中药牛膝在体外对血管内皮细胞的影响，报告如下。课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特

3、别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果1材料实验动物Wistar大鼠,均为雄性,体重220-280g,由吉林大学实验动物中心提供。实验药物牛膝醇提物，由长春中医药大学新药药理实验室制作，每毫升含生药。牛膝购自北京同仁堂药材有限公司，由长春中医药大学邓明鲁教授鉴定。主要试剂1640培养液(GIBCO公司)、胎牛血清(杭州四季青公司)；Ⅰ型胶原酶(Sigma公司)；兔抗鼠Ⅷ因子、免疫组化染色试剂盒、DAB染色试剂盒(

4、北京博奥森生物技术有限公司)；LPS(Sigma公司)；MTT(Genview公司)。方法.1内皮细胞的培养与鉴定［2-3］以组织贴壁法分离内皮细胞，实验用第3-5代(培养基为1640，含10%胎牛血清)。用第Ⅷ因子相关抗原检测鉴定。.2含药血清的制备选择Wistar大鼠7只，6只分别每日给予牛膝提取液3mL(参照标准为10mL/kg)灌胃，另1只每日给予mL生理盐水作为对照。d后，于最后1次灌药后1h(灌药前禁食不禁水1h)经腹主动脉采血，无菌分离血清，经液氮冷冻后，-20℃保存备用。.3MTT法观察不同浓度的牛膝药理血清对细胞增殖的影

5、响课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果取对数生长期的内皮细胞进行细胞计数，接种于96孔培养板中，使每孔细胞数为5×103个,分为空白组、胎牛血清组(对照组)和牛膝血清组，空白组加入1640培养液(1孔)，胎牛血清组(2孔)加入含10%胎牛血清培养液，牛膝血清组(4-9孔)加入总血清浓度为10%的混合血清，其中牛膝药理血清浓度分别为%

6、、%、%、5%、%、10%，余为胎牛血清，第10、11孔为15%、20%的牛膝药理血清。每组4个平行孔，每孔总反应体系200μL，在37℃，5%CO2饱和湿度条件下培养24h后每孔加入mg/mLMTT0μL，继续培养h，弃液，每孔加入二甲基亚砜(DMSO)100μL，震荡10min使混匀，选择490nm波长，于自动酶标仪上测定各标本吸光度A(OD)值，取各组均数进行统计。.4MTT法观察牛膝血清对体外培养的血管内皮细胞脂多糖(LPS)导致的损伤的防护和修护作用取对数生长期的VEC进行计数，接种于96孔培养板中，使每孔细胞数为5×103个,

7、将VEC分为正常对照组、损伤组、保护组、修护组，每组设4个样本，每孔总反应体系200μL，加入10％胎牛血清后放入3℃，5%课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果CO2培养箱培养2h后弃液，并用PBS轻轻洗3次，保证板上没有血清残留。正常对照组加入2%胎牛血清；保护组分别加入％、1％、％、2％的含药血清，用胎牛血清补足至血清浓度为2%

8、，置入培养箱24h后弃液并加入LPS，使其终浓度为2mg/mL，继续培养4h；修护组先加入LPS，使其终浓度为2mg/mL，置入培养箱中作用48h后加入牛膝中药血清％、1％、％、2％，并用胎牛