无菌检查的方法学验证

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1、无菌检查方法（中国药典2010版）验证方案验证方案编号:起草单位(Composedby):起草人(Composer):审核人(ReviewedbyQC):审核人(ReviewedbyQA):质检部(QCDepartment)日期(Date):日期(Date)：日期(Date):批准人(Approvedby):日期(Date):1.验证口的2.验证人员3.验证依据及参考文件4.仪器与设备5.验证过程5.1培养基及稀释液5.2菌液的培养与制备5.3方法验证试验6.验证总结1.验证目的：本试验是注射液的抑细菌、抑真菌活性及所用的无菌检查方法的可靠性进行验证，以确认该产品在该检验量、该检验条件下无抑菌

2、活性或其抑菌活性已被充分消除至口J以忽略。UP：保证所用的无菌检验方法能对该产品进行准确、可靠的检验。2.验证人员：验证小组组长：验证小组副组长：验证小组成员：3.验证依据及参考文件：验证依据：屮华人民共和国药典2010版二部参考文件：2010年版中国跖典无菌检杳方法、验证操作学习班讲稿汇编（中国药品检验所）4.仪器与设备XG1.DM-0.36B型机动门脉冲真空灭菌器细菌培养箱霉菌培养箱净化工作台5.验证过程：5.1培养基及稀释液5.1.1培养基及稀释液的配制按“中国药典2010版二部附录XIH无菌检查法”屮，有关规定配制本验证所需培养基：名称来源生产批号配制批号硫乙醇酸盐流体培养基改良马丁培

3、养基营养肉汤培养基营养琼脂培养基0.1%蛋白月东溶液0.9%无菌NaCl溶液改良马丁琼脂培养基5.1.2培养基的适用性检验5.1.2.1培养基无菌性检查从以上培养基及稀释液中，每批随机取5支（瓶），培养14天，应无菌生长。结杲记录:名称1#2#3#4#5#结果硫乙醇酸盐流体培养基改良马丁培养基营养肉汤培养基营养琼脂培养基0.1%蛋白陈溶液0.9%无菌NaCl溶液改良马丁琼脂培养基注:无菌生长记为“一”;有菌生长记为“+”结论:5.1.2.2培养基灵敏度检查取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于lOOcfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌、生砲梭菌各2支，另1支

4、不接种作为空白对照，培养3天，逐日观察结果。取毎支装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种小于lOOcfu的口色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天，逐日观察结果。空H对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，则可判该培养基的灵墩度检查符合规定。硫乙醇酸盐流体培养基批号：菌液名称第一天第二天第三天金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽砲杆菌生他梭菌空白对照注：无菌生长记为“一”；有菌生长且生长良好记为“+”；有菌生长但生长较差记为“差”。改良马丁培养基批号:菌液名称第1天第2天第3天第4天第5天白色念珠菌黑曲霉空口对照注：无菌生长记为“一”；有菌生长且生长良好记为“+”；有

5、菌生长但生长较茅记为“差”。结论:5.2菌液的培养与制备5.2.1菌种菌种名称编号批号代数金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003铜绿假单胞菌CMCC(B)10104枯草芽砲杆菌CMCC(B)63501生砲梭菌CMCC(B)64941白色念珠菌CMCC(F)98001黑曲霉CMCC(F)980035.2.2菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽砲杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，30〜35°C培养18〜24小时。用0.9%无菌NaCl溶液制成每lml含菌数小于lOOcfu的菌悬液。取肉汤培养物lml+9ml().9%无菌NaCl溶液，十倍稀释至10乍〜i()T稀释级可得约为50〜10

6、0cfu/ml的菌悬液。用营养琼脂培养基做活菌计数备用。接种生砲梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30〜35°C培养18〜24小时。用0.9%无菌NaCl溶液稀释至10^〜KF?稀释级制成每含菌数小于1OOcfu的菌悬液。接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基屮，23〜28°C培养24〜48小时。用0.9%无菌NaCl溶液制成每1ml含菌数小于lOOcfu的菌悬液。取改良马丁培养物lml+9ml0.9%无菌NaCl溶液，十倍稀释至10一：〜10-7稀释级可得约为50〜100cfu/ml的菌悬液。用改良马丁琼脂培养基做活菌计数备用。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基斜面培养基

7、屮，23〜28°C培养5〜7天，加入3〜5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌NaCl溶液，将他了洗脱。然后,吸出抱了悬液至无菌试管中，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌NaCl溶液制成每1ml含抱子数小丁1OOcfu的抱子悬液。取培养物lml+9ml0.9%无菌NaCl溶液(含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80)十倍稀释至ICT1稀释级可得约为50〜l(