实验,陈家龙蔡远

《实验,陈家龙蔡远》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、植物色素的分离、提取和测定学号：201204062065201204062064姓名：陈家龙蔡源组别：8组班级：应工12-2学院：化工学院指导老师：黑晓明—:摘要：这次的实验内容主要是，叶绿素的提取及测定。首先是配置的一系列的分离叶绿素的相关试剂。分离叶绿素是用柱层析的方法。分离出的顺序是胡萝卜素，叶绿索a,叶绿索b,叶黄索。然后画滤液细线，叶绿体中的色索分离(在4种不同比例的试剂屮分离)。最后观察实验结果，计算数据。还有就是测定胡萝卜素的透光度。在叶绿素的提取与分离实验中，对操作方法进行了探究，提岀了实验屮的注意事项常见原因及对策•莫屮对滤纸划线方法设立

2、了对照实验，从而对划线方法进行了重点改进，以确定最好的方法.二：关键词：色索，提取，画线，柱层析，紫外分光。二：刖B:现行高中牛物新教材的教学内容中增加了大量的实验，这是党和国家推行素质教育，培养学生动手能力、创新能力的重大改革。生物实验课在整个屮学阶段的生物教学中占有举足轻重的地位，我们不仅重视常规实验教学的开展，还不断地研究实验方法的改进。如叶绿体中色索的提取和分离实验(高中生物原教材中的实验4,新教材屮的实验8),实验的口的是要求学生理解和掌握提取和分离叶绿体中色素的方法，探索叶绿休中有儿种色素。它是高中必做实验中难度较大的一个探究性实验，过去做这个

3、实验所需步骤多，时间长，而且实验结果不令人满意，为此进行多次研究探讨，进行模拟，对这一实验方法进行了改进，使得实验时间缩短，实验准确，层析分离的效果明显。叶绿素种类：胡萝卜素，叶绿素a,叶绿素b,叶黃素。提取、分离方法：1.层析方法：(1)条形滤纸层析(2)圆形滤纸层析2.画滤液细线的方法:⑴毛细吸管法⑵硬笔法⑶芒箕法⑷卬泥法测定：紫外线透光。木次实验用的方法分别是：圆形滤纸层析，毛细吸管法，紫外线透光。四：实验部分：实验仪器与试剂1.主要仪器：载玻片(2.5cmX8cm)4片研钵1个层析柱(4)3.0cmX30cm)1支分液漏斗(100mL)2个玻璃漏斗

4、1个圆底烧瓶（100mL）l个广口瓶(e3.0cmXI8cm)1个烧杯（50mL）l个烧杯(lOOmL)l个烧杯(300mL)l个锥形瓶（100mL）3个玻璃棒I支1.主要试剂:硅胶G(300g-400g)C.P.二氯乙烷C.P.石油瞇(B.P.60°C〜90°C)C.P.丙酮C.P.苯C.P.乙酸乙酯C.P.二乙胺C.P.乙醇(95%)C.P・实验内容：菠菜色索的提取称取20g洗净后用滤纸吸干的新鲜（或冷冻）的菠菜叶，用剪刀剪碎并与20mL乙醇拌匀，在研钵中研磨约5min,然后用布氏漏斗抽滤菠菜叶，弃去滤液。将波菜叶放回研体，每次用20mL3：2（体积比

5、）的右油僦一乙醇混合液萃取两次，每次需加以研磨并且抽滤。合并深绿色萃取液，转入分液漏斗，每次用10mL水洗涤两次，以除去萃取液中的乙醇。弃去水层，石油醯层用无水硫酸钠干燥（约15min），用玻璃漏斗塞脱脂棉滤掉干燥剂，滤液滤入圆底烧瓶，留击ImL做薄层层析，其余用水浴蒸徭浓缩约至ImL为止。2、薄层层析定性分析1）薄层色谱板的制备称取适量的竣甲基纤维索钠（CMC-Na）,分次加入7CTC水中，配制30ml0.5%CMC-Na水溶液。抽滤，滤液煮沸1〜2分钟。2）取15mlCMC-Na水溶液，倒入研钵中，加入3g薄层层析硅胶。研磨0.5ho3）取三块玻璃片，

6、用研磨棒醮取调制后的硅胶均匀涂在玻璃片上，注意要使硅胶分布均匀。室温下晾干24小时，在110°C活化1小时，备用。2）展开剂的配制用石油醸和乙酸乙酯按不同比例混合，得到不同极性的展开剂：如9:1,3:1,1:1,1:3,1:9o3）分离用毛细点样管吸取少量色素溶液，将其分别滴在薄层板底边约1cm处。点样时点样管保持垂直，点样要尽量小而圆，点样时不要点破硅胶层，如样品浓度较稀，可重复点2-3次。点后晾干，同样点样4块薄层板。薄层层析需在密闭的容器中进行，木实验在广口瓶中进行薄层层析。在广口瓶中分别装入2）配好的展开剂，展开剂装入高度约为0.5cm（这高度要小

7、于载玻片上的滴样高度）。将薄层板放入广口瓶屮，瓶口加盖，注意点样的位置必须在展开剂液面之上。当展开剂上升到薄层板的3/4高度后，取出薄层板，用铅笔或小针标记展开剂到达的位置，晾干后，记录展开的各点的中心位置。计算各展开点的Rf值。按上述方法测定色索样品在各种展开剂条件下，各展开点的Rf值。确定分离出胡萝卜素、叶绿素&、叶绿素b、叶黄素的最佳展开剂。3、柱层析定量分离1）装柱用100mL烧杯量取20g柱层析用硅胶（200-300R,与80ml石油瞇混合均匀后迅速倒入内径为3cm的层析柱中。小心打开柱下活塞，用锥形瓶收集石油瞇。硅胶液面不断下降。收集的石油毬可

8、从上面重新倒入层析柱屮。柱屮溶剂面，由下端活塞控制，不使满溢，更不