实时荧光定量pcr技术在粮油转基因成分检测中的应用

《实时荧光定量pcr技术在粮油转基因成分检测中的应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、实时荧光定量PCR技术在粮油转基因成分检测中的应用大连工业大学摘要：随着我国在转基因粮油上的产量增加，造消费作物上随Z增加，在作物的进行育种中，更为广泛地采用转基因技术，所以对我们而言在检测粮油转基因物的成分时，就要分析其技术。随着技术的发展，出现了一种可以实时地检测的技术-实时荧光定量PCR技术，由于优势很多广泛地应用在粮油检测中。基于此木文对实时荧光定量PCR技术进行分析，重点对其在粮油转基因成分检测中的应用进行阐述，以供参考。关键词：实时荧光定量PCR;粮油;转基因成分;应用;1引言在我国，由于转

2、基因技术的逐渐成熟化，以前转基因农作物还停留在实验阶段，目前开始在具体的环境中得到利用。油菜籽、玉米、大豆以及棉花是百分之九十五的转基因农作物都集中于此。而且很多的农作物已经实现了生产上的商品化，其种植面积不断扩大化。作为粮油质检机构，就要在转基因检测中遵循准确、快速以及简便的原则进行，在定量以及定性进行进口转基因物的检测技术进行加强，就要确保监督管理食甜的安全性。当前对待转基因的食品，人们越来越重视，而且更加重视其建立相关的转基因成分标签制度，提高了更为严格的定量分析要求。在检测转基因的过程中采用传统

3、的PCR技术进行定性分析，因为反应抑制、不适当的操作以及高敏感性差导致假阳性的岀现，传统的方法已经满足不了现在的检测要求。因为科学技术的成熟化，实时荧光定量PCR技术的不断创新，其操作简单、特异性强、具有很高的灵敏度，可以定量地分析DNA模板，而且可以实时地检测、没有产生污染、结果准确度高以及可以实现自动化等优势。2实时荧光定量PCR技术2.1实时荧光定量传统PCR技术是可以定性进行，随着发展出现了实时荧光定量PCR技((RealtimePCR),它可以实现定量核酸的技术。在美国AppliedBiosy

4、stems公司此技术就是由此开始的，就是利用荧光基团加入到PCR的反应体系中，而且检测的荧光信号强度以及DNA数量关系是线性相关。可以实时地对整个PCR进程在荧光信号的积累下进行检测，进一步DNA扩增曲线就刻意得到，对于定量分析未知模板时其中之一的方式就是可以利用标准曲线进行。在PCR反应中，D7A拷贝数就会产牛，而且增大反应循环数，DNA拷贝数增加是以指数的形式进入到平台期，实时荧光定量PCR技术和传统的PCR技术相比较，由于传统上定量分析PCR采用终点法存在缺陷，但实时技术可以弥补其缺陷，可以实时地

5、在PCR反应扩增中进行检测，而且荧光信号经过连续的分析，就会扩增，当荧光信号被检测出，就会得到曲线。所以指数期间时PCR反应可以进行对PCR产物量的检测，在某一个点进行，进一步对模板的起始含量进行推断。实时荧光定量PCR反应时，处于指数期，为了更为对样本进行检测，要进行荧光信号阈值的设置，而且荧光的本底信号是基于PCR反应之前的循环荧光信号进行，数量确定15个。样本的域值循环数Ct就可以用此进行定义，其模板的Ct值和模板起始拷贝数对数是线性相关，Ct值随着起始拷贝数的增加值越来越小。对于未知样品Ct值，

6、利用标准的曲线就可以对样品的起始拷贝数进行计算。2.2实时荧光PCR类型进行实时地定量分析时有两种方式:非探针类(SYBRGreen)以及探针类，采用Tapman探针。前者扩增产物的原理就是利用特殊的设计或者染料进行，易操作，低成木，但是特异性低;后者对引物进行指引的增加是用和靶序列特异进行杂交的探针进行，优势就是特异性较高。2.3实时荧光定量PCR技术要求2.3.1实验室条件根据《转基因产品检测实验室技术要求》(GB/T19495.2—2004)的相关要求设立PCR实验室，而且检测质量以及实验室的总体

7、规定应该遵循，粮食机构就是定量定性地检测对植物的样木的转基因。在对转基因进行检测的实验室内，对于实验的各区域避免不相关的人员进入。检验核酸时，如果条件允许,当区域进行隔开时，就要有缓冲间的设置，而且缓冲间相连的工作区域压力规定为正值，缓冲间为负压，为了以免因为空气的流动，导致所处的环境遭到污染，就要有连锁的装置的安装在缓冲间以及工作间之间。检验不同种类的核酸时,工作区域应该相互独立，之间不能对开门，并用标志进行区分。若是区域之间是相连的，要将物品传递窗进行安装，对此工作区就有要求，要进行254mn波长的

8、紫外灯的安装，而且是40W的，每隔20ni区域进行安装，灯和地面距离误差在2.0±0.Im范围。由于实验室的工作区域就是对试剂进行制备的区域，主要进行分装试剂、制备贮存的试剂以及制备在主反应的混合液，所以就要进行设置。要注意的是，没有对控制气流压力有严格的规定，但是压力梯度，为了以相邻间的气溶胶流动污染，就要规定为正值，和邻近区相反，注意在本区域尽量避免走动。在区域进行试剂的原材料贮存，而且它的制备也要在区域进行。处理样品就要提取样品的核酸