cask下调表达对人血管内皮细胞ecv-304增殖能力的影响

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1、CASK下调表达对人血管内皮细胞ECV-304增殖能力的影响陈建，苏踊跃，梁光萍，陈渝，罗向东，杨宗城(第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，重庆400038)摘要：目的建立CASK下调表达细胞株，研究CASK下调表达对ECV-304细胞增殖能力的影响。方法将包含针对CASK基因干扰siRNA片断的pGenesil-1-hCASK重组质粒转染人ECV-304细胞株，经G418加压筛选，成功筛选出CASK下调表达的细胞株。用蛋白免疫印迹法鉴定转染细胞中CASK基因的表达水平。采用流式细胞技术、MTT法观察CASK下调表达对ECV-304细胞增殖能

2、力的变化。结果成功筛选出CASK下调表达ECV-304细胞株（siCASK细胞株），这些细胞在传代过程中绿色荧光蛋白能维持表达，细胞株中转染阳性率在90%以上；经蛋白免疫印迹法检测hCASK表达明显降低；siCASK细胞株中G0/G1细胞比率下降，G2M期细胞比率明显上升，增殖指数明显提高，生长曲线左移。结论成功建立了CASK下调表达的ECV-304细胞株，CASK下调表达可导致细胞增殖能力增强。关键词：RNA干扰；CASK；真核细胞转染；细胞增殖中图法分类号：文献标识码：AEffectsofCASKdown-regulationontheproliferationofECV

3、-304cellsCHENJian,SUYong-yue,LIANGGuang-ping,CHENYu,LUOXiang-dong,YANGZong-cheng(StateKeyLaboratoryofTrauma,BurnsandCombinedInjury,InstituteofBurnResearch,SouthwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China)Abstract:ObjectiveToestablishcalcium,calmodulin-associatedserine/

4、threoninekinase(CASK)down-regulationECV-304celllineandtostudytheeffectsofCASKdown-regulationontheproliferationofECV-304cells.MethodsTherecombinantpGenesil-1-hCASKplasmidscontainingsiRNAtargetingCASKgeneweretransfectedintoECV-304cells.ThestablecellstrainwasscreenedbyaddingG418intocellculture

5、medium.TheproteinexpressionlevelsofCASKgeneweredetectedbyWesternBlotting.FlowcytometryandMTTmethodwereusedtoinvestigatetheeffectsofCASKdown-regulationontheproliferationofthetransfectedcells.ResultsCASKdown-regulationcellstrain,siCASKcellline,wassuccessfullyscreened.Thesecellscouldmaintainov

6、er90%greenfluorescentproteinexpression.ThedecreasedexpressionofCASKcouldlowerbutenhancethecellpopulationatG0/G1phasebutG2Mphaseandleadtoleft-shiftofthecellgrowthcurve.ConclusionCASKdown-regulationcellstrainwassuccessfullyconstructedandCASKdown-regulationcouldenhancethecellproliferation.Keyw

7、ords:RNAinterference;CASK;eukaryotictransfection;cellproliferation基金项目：国家重点基础研究发展计划（973计划）（2005CB522601）；国家自然科学基金重点项目（30730093）SupportedbytheNationalBasicResearchProgram(973Program,2005CB522601）andKeyProgramoftheNationalNaturalScienceFoundationofChina(30