基于pcr技术的水貂毛皮鉴别研究

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1、基于PCR技术的水貂毛皮鉴别研究　　摘要：本研究应用荧光PCR技术鉴定水貂毛皮。方法建立：市场采购32件鞣制动物毛皮，提取足够的DNA，应用荧光PCR方法检测水貂成分；其中21件水貂毛皮检测到水貂成分，11件其他动物毛皮均未检出水貂成分，方法特异性达到100%。方法验证：市场采购10件毛皮服装样品，比较宏观法与PCR法结果；其中宏观法鉴定结果与PCR法一致，宏观法无法确定水貂的4件样品均可通过PCR法明确。本方法可用于水貂毛皮的鉴定，并作为宏观法的有效补充和验证。　　关键词：水貂毛皮；鉴别；PCR方法　　中图分类号：TS57文献标志码：A　　Identi

2、ficationofMinkFurBasedonPCRMethod　　Abstract：ThestudyrelatestotheidentificationofminkfurbasedonPCRmethod.TestmethodwasestablishedbyextractingenoughDNAfrom32samplesoftannedanimalfurfrommarketandemployingthePCRmethodtoidentifythesamples.Aftertesting，21sampleswereprovedtocontainkeyco

3、nstituentofmink，whiletheother11sampleswerecomponent-freebyPCRmethodwiththespecificationof100%.ThistestmethodwasvalidatedbycomparingtheresultsofconventionalandPCRmethodrespectivelyfor10furcoatsamplesfromthemarket.Theresultsofconventionalmethod7wereidenticalwithPCRmethod，and4sample

4、sthatcouldn’tbeidentifiedbytheconventionalmethodweremeasuredbythePCRmethod.Eventually，thePCRmethodcanbeusedinthefieldofidentificationoftannedminkfurandassupplementandverificationforopticalmethod.　　Keywords：minkfur；identification；PCRmethod　　貂皮素有“裘中之王”之称，其种类繁多，有水貂、石貂、松貂、渔貂、扫雪貂等品种，其

5、中以水貂最为常见，紫貂最为名贵。目前，毛皮鉴定常采用宏观观察法和显微镜观察法，尚无可靠、稳定、可重复的标准鉴别方法。一些形态接近或经过特殊处理工艺的皮毛样品鉴定仍存在难点，如黄狼皮与水貂毛皮在电子显微镜下也难以区别。某些商家利用消费者缺乏皮毛知识和鉴别经验，在商品上标示山貂、黄金貂、艾狐貂、青根貂等近似的名称或类别，混淆消费者。因此，如何方便、准确、快速地鉴别毛皮种类一直是质检部门和广大消费者关注的焦点。　　本研究拟探索在分子水平上实现物种鉴别，突破传统方法依据动物纤维形态结构鉴别的局限性，更加客观、稳定。但是，由于动物毛皮经过鞣制、漂白和染色处理，鞣制

6、皮张中的DNA高度降解，且含有大量的酶抑制物，因此提取足够量的DNA成为应用PCR检测的技术难点。本文通过研究鞣制貂毛皮的DNA提取技术，得到稳定可靠的DNA，利用PCR技术鉴别水貂毛皮，并与宏观观察法、显微镜观察法相比较，为貂毛皮的鉴别检测提供一个可靠的检测方案。　　1材料与方法7　　1.1材料与试剂　　实验用水貂、紫貂、艾虎等鞣制动物毛皮购自大连某貂业有限公司、河北大营毛皮市场、桐乡皮草大世界；加工过程中的水貂毛皮购自桐乡某皮草有限公司。貂毛皮成衣购自河北大营毛皮市场、海宁皮革城和淘宝、京东等网络店铺。　　裂解液：2%十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）

7、、1.4mol/LNaCl、0.1mol/LTris-HCl、0.02mol/L乙二胺四乙酸（EDTA）pH值8.0；DNA提取试剂盒（Roche，11796828001）；PCR预混液PremixExTaq（TaKaRa，RR390）。　　1.2仪器与设备　　7500fast荧光定量PCR仪（美国ABI公司）；6870冷冻研磨机（美国SPEXSamplePrep公司）；DS-11超微量分光光度计（美国DeNovix公司）；5415R离心机（德国Eppendorf公司）。　　1.3方法　　1.3.1鞣制毛皮DNA的提取　　鞣制皮张在平整处取约4cm2，成

8、衣在腋下、底边处分别取样，各4cm2。将皮张剪成直径5mm左右小块，使用冷冻研磨