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《caco—2细胞单层模型探究黄芩提取物中黄芩苷转运机制和白芷提取物对其转运影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、Caco—2细胞单层模型探究黄苓提取物中黄苓昔转运机制和白芷提取物对其转运影响［摘要］目的：研究黄苓提取物中黄苓昔的吸收转运机制以及白芷提取物对其吸收影响，分析探讨白芷提取物对黄苓昔转运的影响机制。方法：建立人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞模型，利用此模型研究pH、时间、药物浓度、温度对黄苓提取物中黄苓昔的转运影响；研究黄苓昔在P-gp,MRP蛋白专属抑制剂存在与否时黄苓昔在Caco-2细胞模型的双向转运情况；并考察白芷提取物对黄苓昔吸收转运的影响。结果：379环境下黄苓昔转运在pH7.4条件下吸收较好，且存在浓度依赖性；4°C环境下蛋白失活，转运量降低;黄
2、苓昔双向转运PDR为0.54,P-gp抑制剂维拉帕米、MRP抑制剂丙磺舒加入后，黄苓昔BL-AP转运减少，而PDR无差异。加入白芷活性成分香豆素、挥发油、香豆素与挥发油混合物后黄苓昔转运分别提高了2.34,3.31,3.13倍。结论：黄苓昔主要转运机制为被动转运，兼有外排蛋白参与。白芷活性成分对黄苓昔有促吸收作用，此作用可能与黄苓昔的被动转运机制有关，白芷提取物打开了细胞间的紧密连接，也可能与白芷抑制外排蛋白的表达或功能有关。［关键词］Caco-2细胞模型；白芷提取物；黄苓昔；转运机制；P-gp；MRP黄苓昔作为黄苓主要有效成分，也是黄苓及其制剂中主要的质量指
3、标，具有抗氧化、抗菌、抗病毒、抗致癌等作用[1],此外，研究表明黄苓昔在外周多种组织器官具有抗炎、抗血栓、扩血管及解热等多种药理作用[2-3]o同时，黄苓昔是一个难吸收药物[4],导致其较低的生物利用度。白芷-黄苓为常用药对，有报道挥发油具有促吸收作用，香豆素可以抑制代谢酶活性[5],白芷主要成分为香豆素与挥发油，但有关黄苓提取物中黄苓昔的吸收机制研究较少。本文首先利用人源结肠腺癌Caco-2细胞单层模型研究黄苓昔的吸收机制，考察黄苓昔吸收过程中可能遇到的肠道屏障，同时利用Caco-2细胞模型验证白芷活性成分对黄苓昔促吸收作用,探讨白芷提取物促进黄苓昔转运吸收
4、的可能机制，有助于阐明白芷-黄苓药对的配伍原理。1材料Forma3111二氧化碳培养箱（Thermo）；TS1OO-F倒置显微镜（Nikon）；HHS型电热恒温水浴锅（上海博讯实业有限公司）；TDZ4A-WS低速台式离心机（长沙湘仪离心机）；高速冷冻离心机（德国，SIGMA公司）；QYC-Z00恒温摇床（上海福玛实验设备有限公司）；Agilent1200高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；Millicell-ERS电阻仪（Millipore,USA）；24孔培养版（Costor）；SZ-97自动三重纯水蒸馆器（上海亚东生化仪器厂）。DMSO、环鞄菌素A（批号
5、C8780）购自北京Solarbio科技有限公司；黄苓昔对照品（批号101765-200408）购自中国食品药品检定研究院；黄苓提取物（以黄苓昔计含量为160.98mg•旷1生药）、白芷挥发油（提取率2.0%,a-菠烯质量分数为6.71%.甲基环癸烷7.4%、正十四烷醇3.80%）和白芷香豆素（总香豆素含量为50%）均为自制；盐酸维拉帕米和MK-571（批号11711）购自美国Sigma公司；丙磺舒（北京燕京药业有限公司提供）；甲醇（色谱纯，德国Merck公司）；磷酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；双蒸水。2方法2.1色谱条件PhenomenexLuna
6、5uC18色谱柱（4.6mmX250mm,5um）,流动相为乙睛水溶液-0.2%磷酸水溶液24:76,等度洗脱，检测波长为280nm,柱温为25°C,体积流量为1mL•min-1,进样量为20uLo2.2Caco-2细胞模型的建立Caco-2细胞培养于37°C,5%C02的环境中，采用DMEM培养基，其中含10%胎牛血清、1%非必需氨基酸、1%谷氨酰胺以及青霉素-链霉素双抗液。隔天换1次培养液，每4天按1：3的比例传代。将对数生长期细胞按1X105mL-1接种到24孔培养板上，接种后隔天换液，7d后每日换液，培养至21do参照文献方法[6],检测碱性磷酸酶活性
7、和各孔跨膜电阻（跨膜电阻大于500Q・cm-2）,选择Caco-2细胞单层生长状态完好、符合转运条件的M订licell膜用于转运实验。实验前，用37匸空白Hank's缓冲盐溶液（HBSS溶液，pH7.4）清洗细胞单层2次，之后放入5%C02,37°C培养箱内培养30min。2.3提取物的制备白芷香豆素：取200g白芷，加8倍量75%乙醇回流提取，每次1h,提取3次，收集3次提取液，放冷，过滤，减压浓缩至生药1g・mL-1,3倍量乙酸乙酯萃取3次，将每次的萃取液合并，减压回收乙酸乙酯至干。称取200g大孔树脂HPD-100,回收乙酸乙酯后的白芷加水100mL混悬
8、，上样，分别用5倍生药量的水、5倍生药
