小麦成熟胚基因枪法和农杆菌法遗传转化的研究

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1、分类号学号641700200671225学校代码10487密级硕士学位论文小麦成熟胚基因枪法和农杆菌法遗传转化的研究学位申请人：李圣纯学科专业：生物化学与分子生物学指导教师：何光源教授汪越胜副教授答辩日期：2008年5月27日AThesisSubmittedinfulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceStudyonGeneticTransformationofWheatMatureEmbryoViaParticleBombardmentandAgrobacteriumC

2、andidate:ShengchunLiMajor:BiochemistryandMolecularBiologySupervisor:Prof.GuangyuanHeAssociateProf.YueshengWangHuazhongUniversityofScience&TechnologyWuhan430074,P.R.ChinaMay,2008独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究

3、做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到，本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在_____年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月

4、日日期：年月日华中科技大学硕士学位论文摘要小麦(TriticumaestivumL.)作为世界上最重要的粮食作物之一，应用植物基因工程技术对其进行改良品质、增强抗逆性和提高产量的研究有着十分重要的意义。小麦遗传转化的成功依赖于其高频植株再生体系的建立、合适的表达载体、各种基因转化方法的不断完善及相应分子检测系统的确定和稳定纯合系的获得等关键因素。因此建立稳定的农艺性状优良的小麦栽培品种高频植株再生体系，寻找合适高效的遗传转化方法是亟待解决的问题。本文以湖北省栽培小麦品种鄂麦12成熟胚为主要材料，比较研究了五种方法对小麦成熟胚转化的影响，具体包

5、括：基因枪轰击质粒；根癌农杆菌侵染；基因枪轰击(无质粒)后，农杆菌侵染；基因枪轰击(有质粒)后，农杆菌侵染及基因枪直接轰击菌液。并经过分子生物学分析所获得的转GUS基因植株。结果表明，根癌农杆菌和基因枪相结合的新型转化方法中，基因枪轰击空白对照后，再进行农杆菌侵染实验，这时的愈伤组织成活率、分化率和GUS瞬时表达的平均蓝点数分别为52.15%、32.14%和10.49，与其它转化方法相比，有了较大的提高，具有巨大的应用价值。小麦基因工程的研究重点之一在于改善其品质，如pin基因在小麦的硬度品质上有着重要的作用。我们成功构建了含品质基因pinb

6、的表达载体pB-pinb，为农杆菌法向小麦成熟胚转入目的基因做了准备。关键词：小麦；成熟胚；基因枪；根癌农杆菌；结合法；遗传转化；载体构建I华中科技大学硕士学位论文AbstractWheat(TriticumaestivumL.)isoneofthemostimportantfoodcropsintheworld.Genetictransformationprovidesamethodforgeneticmanipulationofwheatinordertoenhanceitsagronomicperformance,resistancet

7、obioticandabioticstresses,yieldandend-usequality.Thesuccessofwheattransformationreliesonthehighfrequencyofwheatregenerationsystem,suitableexpressionvector,powerfultransformationmethods,transgeneanalysisandtheproductionofhomozygotetransgeniclines.Therefore,itisessentialtoest

8、ablishhighfrequencyofplantregenerationsystemfromelitewheatcultivarwithexcellentagr