【硕士论文】碱基切除修复基因MUTYH与结直肠癌的易感性的相关研究.pdf

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1、·中文论著摘要·碱基切除修复基因MUTYH与结直肠癌易感性的相关研究刖舌DNA氧化损伤是生物体内基因突变的常见原因之一，在人类中活性氧簇对DNA损伤大约每天每个细胞104次。ROS可以是细胞新陈代谢的产物，也可因外源性的物理或化学的氧化作用而产生，一旦其超过生物体内的抗氧化系统所承载的极限，累积的ROS便可攻击DNA，造成核内和线粒体DNA的损伤，如碱基错配、修饰、脱嘌呤或脱嘧啶位点的形成、DNA断裂以及DNA蛋白质交联等。ROS也是某些退行性疾病如老化、培症、免疫系统功能下降、神经退行性变、白内障等发生的原因。DNA氧化损伤产物主要有8．氧．脱氧鸟苷和2．羟基腺苷，其中8

2、．氧．脱氧鸟苷最稳定，是最重要的产物。在细菌和酵母体内，8．氧．脱氧鸟苷引起DNA损伤的机制可以是模板链中鸟嘌呤的直接氧化，也可以是核苷酸池中游离鸟苷的氧化，DNA聚合酶与8-oxodG：A中腺嘌呤的结合效率比胞嘧啶高5到200倍。因此，如果8-oxodG：C不能得到及时修复，在复制中8-oxodG易与A错配，继续复制在子链中形成A：T配对，最终导致G：C_÷A：T的碱基颠换，从而引起相关基因功能的改变，促进肿瘤的发生。碱基切除修复途径在生物体内是保守的，在参与修复氧化损伤所引起的突变中起到至关重要的作用。其中NUDTl基因定位于染色体7p22，其蛋白质发挥作用的时间在DN

3、A复制之前，它水解核酸池中氧化的三磷酸鸟苷，阻止其进入复制过程。OGGl基因定位于染色体3p26．2，其蛋白质在复制过程中识别并切除8-oxodG：C中的8-oxodG，启动复制中的BER系统，MUTYH基因定位于染色体lp32．1至p34．3，MUTYH基因编码一种特异的腺嘌呤转葡糖基酶，在复制后切除子链DNA中与母链8-oxodG错配的A。如果MUTYH蛋白失活，则易导致复制肠癌的手术http://www.cngcwk.com/直肠癌的治疗过程中G：C----A：T的颠换。研究表明在癌基因及抑癌基因中，由于碱基切除修复途径缺陷所引起的基因突变频率的增加能导致肿瘤发生。事

4、实上，以前报道的在多发性结直肠腺瘤性息肉病和结直肠癌中腺瘤性结直肠息肉病基因高频率体细胞G：C--'A：T的突变均与MUTYH双等位基因的胚系突变有关。此类疾病导致的Y165C，G382D，466delE，E466X以及Y90X的突变已经在高加索人，印度人，巴基斯坦人以及其他种族中被报道过。其中Y165C及G382D突变在欧美高加索人群患者中突变率约占80％。其基本突变形式为Y165C-÷Y165C或G382D'--，G382D纯合型突变和Y165C--*G382D复合型杂合性突变。但是，这两种高发突变却在包括日本人在内的东亚人种中未被检测到。提示这两种突变是种族特异性等位

5、基因突变。基于上述发现，我们猜测日本结直肠患者MUTYH等位基因Y165C和G382D突变的低外显易感性与之前报道的APC和CHEK2基因突变的情况相似，即存在人种的差异。因此，我们检测三个日本MAP疑似家系的APC与MUTYH基因的全部外显子，发现一个新的MUTYH基因单核苷酸多态性位点MUTYHIVSl．5A>C。在283例日本结直肠癌患者和307对照人群中进行单核苷酸多态性检测。应用病例对照研究发现日本人群中MUTYH单核苷酸多态性位点IVSl．5A>C与结直肠癌发病密切相关。我们的结果表明MUTYI-I等位基因突变位点IVSI．5A>C很有可能是日本人群结直肠癌的易

6、感位点之一。材料与方法一、材料1、家系三个疑似MAP受检家系血样标本均来源于日本浜松医科大学附属医院检验科。且经患者及其家族成员同意对其血样进行基因筛查。病理诊断由日本浜松医科大学附属医院病理部做出，病人资料由浜松医科大学附属医院住院部提供。2、血样及细胞系283例结直肠癌患者血样从日本浜松医科大学附属医院检验科获得。其结直肠癌患者病理诊断由日本浜松医科大学附属医院病理部做出。307例对照组血样来自2肠癌的手术http://www.cngcwk.com/直肠癌的治疗20．74岁日本福冈地区无结直肠手术史，无家族性腺瘤样息肉病、炎症性肠病，有能力并自愿参加检测的非结直肠癌人群

7、。实验中70种癌细胞系均有日本浜松医科大学第一病理提供。二、方法1、DNA提取对每个受检者抽取约5ml静脉血，经DNA提取试剂盒QIAamp@DNABloodMaxiKit提取受检者全血中DNA。2、砌临提取对每个受检者抽取约5ml静脉血，经RNA提取试剂盒PAXgeneBloodRNAKit提取受检者全血中RNA。3、细胞系DNA提取应用DNeasy@TissueKit提取70种癌细胞系DNA。4、引物的设计与合成在GENEBANK中登载人APC(NM000038．2)及MUTYH(NM012222．1)基因全序