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1、GB/T5413.25-1997前言本标准等同采用美国公职分析化学师协会(AOAC)方法，测定的是具有生物效价的肌醉含量。本系列标准从实施之日起，代替GB5413-85,本标准由中国轻工总会提出。本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负贵起草单位:国家乳制品质量监份检验中心。本标准参加起草单位:卫生部食品卫生监份检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀集(中国)投资服务有限公司.本标准主要起草人:张玉杰、王芸、房玉国、王克新。中华人民共和国国家标准婴幼儿配方食品和乳粉Gs/T5413.25-1997肌醇的测定代替
2、GB5413-85Milkpowderandformulafoodsforinfantandyoungcbildren-Determinationofinositol，范围本标准规定了肌醇的测定方法。本标准方法一适用于婆幼儿配方食品和乳粉中肌醇的测定，方法二适于乳粉中肌薛的测定.方法一徽生物法2方法原理通过Saccharomycesuvaru二的生长情况来评价肌醉的含量。3试荆、菌种和培养荃所有试剂，如未注明规格，均指分析纯;所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3.1盐酸:体积比为1，1将体积分数为37%的浓盐酸SOm
3、L用水稀释至lOOmL,3.2氢氧化钠:c(NaOH)为lmol/L将4鲍氢氧化钠溶解于水中，稀释至l000mL,3.3肌醉标样:无水晶体。3.4菌种Saccharomycesuvarum,3.5培养基3.5.1链泡排菌琼脂培养基:3号蛋白陈5g,酵母浸膏5g,麦芽糖40g,琼脂15g,3.5.2肌醉测定用培养基:葡萄糖1oog,柠檬酸钾log，柠檬酸2g,磷酸二氢钾1.1g,撅化钾0.85g，硫酸镁。.25g,抓化钙。.25g,硫酸锰50mg,盆化亚铁50mg,DL一色氨酸80mg,L-$t氨酸。.1g,L一异亮氨酸0.5g
4、,L-赖氮酸0.5g,L一蛋氮酸0.2g,DL一苯基丙氨酸0.2g,L-酪氨酸0.2g,L一天门冬酞胺0.8g,DL一天门冬氮酸0.2g,DL一丝氮酸0.lg，甘氨酸。.2g,DL一苏氨酸0.4g,L-绷氨酸0.5g,L一组氨酸。.124g,L-脯氮酸0.2g,DL一丙氨酸。.4g,L一谷氨酸。.6g,L-精氨酸0.48g,盐酸硫胺素500pg，生物素16pg,泛酸钙5mg,盐酸毗哆醉lmg，加蒸馏水至1000mL,pH5.2士0.2(250C),4仪器常用实验室仪器及:4.1pH计。国家技术监，局1997一05一28批准19
5、98一09-01实施GB/T5413.25-1997250mL圆底烧瓶，与冷凝器连接的锥形玻璃接头。:.;比色仪5样品制备5.1贮备菌种的制备5.1.1从纯菌种Suva、二中转接2个以上已制备好的麦芽浸出汁琼脂斜面。30℃培养16-24h,贮于冰箱中，保存期不要超过2周，然后再转挤到新的琼脂斜面上。5.1.2接种的准备最好在使用的当天从贮备菌种中转接到新配制的麦芽浸出汁琼脂斜面上，30℃培养16^-24h。用接种环无菌地转接该菌种到一个灭菌生理盐水中，直到得到一定浓度菌体细胞的悬浮液。为了测定，制备一个醉母菌悬浮水溶液，这个悬
6、浮液中酵母菌的浓度在。.lmg/mL。分光光度计事先用水调到10000透光率，然后测定这个“标准”醉母菌的透光率。将新接种斜面中的菌体细胞移人到无菌生理盐水中，其浓度直到达到与上述标准溶液具有相同的透光率为止。5.2标准溶液5.2.1标准贮备液，肌醇的浓度为。.2mg/mL,称取100mg肌醉(该肌醉标样已放在干燥器中干燥24h)，于容量瓶中用水稀释至500mL,贮于冰箱。5.2.2标准工作液，肌醉的浓度为2)ag/mL,吸取5mL(5.2.1)溶液，用水稀至SOOmL，定容。当天制备。6如作步蕊6，样品的处理6，.1干粉样品
7、精确称取一定量样品，这些样品中约含肌醇0.5mg，移入250mL因底烧瓶中，加100ML盐酸(1:1)(3.1),继续6.1.3步骤。6.1.2液体样品。吸一定量样品，这些样品中约含肌醇0.5mg，加100mL盐酸(3.1)，继续6.1.3步骤。6.1.3将装样品的圆底烧杯与冷凝器联结，经过6h，通过蒸馏将盐酸除去。将剩余物用燕馏水冲到烧杯中，用lmol/L氢氧化钠将溶液的pH值调至5.1士。.1,稀释至250mL，过滤，弃去前部几毫升。这个溶液肌醇的浓度均为2kg/mL,6.2标准曲线按表1顺序加入燕馏水、标准溶液于培养管中
8、，一式三份.表1试管号No.12345、67燕馏水，ML5543210标准溶液,mL0012345按表2顺序加入蒸馏水、样品溶液于培养管中，一式三份。表2试管号No.1234燕馏水，.L4321样品溶液,mL1234cB/T5413.25-19976.4热处理用棉塞或不锈钢帽
