菌膜在原发舍格伦综合症发病中作用的实验研究

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1、四川大学华西。腔医学院博士学位论文Y792825声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别中以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本学位论文是本人在四川I大学读书期问在导师指导下取得的，论文成果归四川大学所有，学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解四川大学有关保留、使用学位论文的规定，有权

2、保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权四川大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段学位论文作者签名：签字日期：疗年年学位论文作者毕业后去向：莉衍置季一P研冠工作单位：却珂《一稍r也联系方式：f：；石吵铅Ⅲ二，通讯地址：辫‘tl‘衣窒j炙多醣l呈邮政编码：甜螂上2，四川大学华西口腔医学院博士学位论文缩略词SSPCKSPLIBSAELISAODMⅡTEPSBDCFDPBHLASS-AfroSS．B，LaSS．C／ANAICA69HTL

3、V—l英文缩略词表英文全称sj69ren’SsyndromepancytokeratinStreptavidin-peroxidaselabelingindexBovinesertlnlalbuminenzymelinkedimmunosorbentassayopticaldensity3-(4．5dimethylthiazol一2-y])一2，5一diphenyltetrazoliumbromideexopotysaccharidesbiofilmdiseasecysticfibrosisdiffusepanbronc

4、hiolitisHumanleucocyteantigenSj69ren’Ssyndromeantigen-AfRoSj69ren’Ssyndromeantigen-B／LaSjogmn’Ssyndromeantigen-C／ANAisletcellantigen69HilmanT-eellleukcmiavirus．1中文名称舍格伦综合征泛细胞角蛋白链霉菌卵白素过氧化物酶标记指数牛血清白蛋白酶联免疫吸附试验吸光度四唑蓝比色试验细胞外多糖菌膜病肺囊性纤维化弥漫性泛支气管炎人类白细胞抗原系统自身抗原A／(Ro)自身抗原t3

5、／(La)自身抗原C／(ANA)岛状细胞抗原69人类自细胞病毒一1四川大学华西口腔医学院博士学位论文菌膜在原发合格伦综合征发病中作用的实验研究博士研究生：何巍导师：李龙江教授中文摘要研究目的：明确细菌菌膜与原发Ss的发病关系，通过研究菌膜成分藻酸盐诱发的免疫反应对正常腮腺腺细胞的作用探讨原发ss发病机理，采用藻酸盐诱发人类原发SsII缶床表现的动物模型。研究方法：首先分离获取成活率高且保持功能的腮腺腺细胞，采用改良DMEM培养基进行腮腺腺细胞的原代及传代培养，观察腮腺腺细胞生长状况，透射电镜观察腮腺腺细胞的超微结构，利用

6、细胞免疫组化法检测细胞中泛角蛋白、0c一淀粉酶蛋白和肌动蛋白的表达情况以鉴定细胞来源，并且分别检测a一淀粉酶蛋白在不同代次腺细胞中的表达情况判断其分泌功能。将藻酸盐(Alginate)与BSA偶连形成具有较强免疫原性的Alginate—BSA交联物免疫兔，按抗原量1．Omg／kg接种于新西兰白兔皮内，间隔lOd加强免疫1次，共加强4次后，利用间接ELISA法检测藻酸盐抗体效价；将原代培养的兔腮腺腺细胞按10‘个／ml接种到96孔板上，置入细胞培养箱继续培养3d，分为5组：A空白对照组、B牛血清白蛋白组、C藻酸盐组、D抗藻

7、酸盐血清组和E抗藻酸盐血清+藻酸盐组，分别加入PBS、牛血清白蛋白、藻酸盐或(和)新鲜抗藻酸盐血清继续培养，分别于1h、6h、12h和24h不同的时间点，取出96孔培养板，采用MTT法检N5组腮腺腺细胞增殖情况；四川大学华西口腔医学院博士学位论文倒置相差光学显微镜观察不同组腮腺腺细胞生长、形态和结构变化；扫描电镜观察E组腺细胞超微结构的改变。动物试验采用已获藻酸盐免疫的新蓖兰白兔16只，随机分为A1、Bl两组，A2、B2组各为6只正常新西兰白兔作为平行对照组，间隔1d经腮腺导管灌注藻酸盐，分别于灌注前、灌注7次(A1、A

8、2组)和14次(B1、B2组)检测类似于人类SS在唾液量、施墨实验(Schirmertest)、T淋巴细胞亚群、腮腺造影和组织病理等方面的改变。研究结果：体外培养腮腺腺细胞具有一定的增殖能力，可传3代，存活4w以上：透射电镜下腺细胞表面可见到微绒毛、胞浆皱褶和细胞顶部的酶原颗粒，胞核大卵圆形，胞质内见线粒体和粗面内质