盐酸小檗碱联合抗真菌药物对红色毛癣菌体外药敏实验分析

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1、中文摘要盐酸小檗碱联合抗真菌药物对红色毛癣菌体外药敏实验研究摘要目的：红色毛癣菌是导致皮肤真菌病的最常见的皮肤癣菌，可引起皮肤和甲板的感染，呈全球性分布【l】。该菌抵抗力强、不易控制，易隐蔽在角质层中故由该菌所引起的皮肤真菌病较难治愈而且容易复发和再感染，从而导致患者生活质量的下降，是目前临床上亟待解决的问题。临床治疗红色毛癣菌病常用抗真菌药物包括伊曲康唑、特比萘芬、氟康唑等，由于用药时间较长，近年来耐药菌株逐渐增多。为降低药物不良反应，减少耐药性，多采取联合治疗。它不仅可以阻止或延迟真菌对药物的耐药性，而且还可减少药物的剂量从而降低药物的毒副作用。因此联合用药越

2、来越受到人们的重视。天然药物成本低廉、来源丰富，安全性好、较少出现耐药。近些年来在天然药物抗真菌方面的研究取得了较大的进步，从中筛选出了多种有抗真菌活性的天然药物【2】，盐酸小檗碱就是其中一种，它可以从天然中药黄连及黄柏等中提取的，是一种广谱抗菌药物。很多学者【34】亦通过各种方法证明了盐酸小檗碱对红色毛癣菌有很好的抑制作用，但多是选用水煎剂或粗提物进行试验，使得其有效成分甚不明确，从而使实验标准及结果判定不统一。本室研究人员曾采用MTT微量稀释法测定盐酸小檗碱纯品对红色毛癣菌有抑制作用，并通过电镜观察不同药物浓度和不同作用时间电镜下红色毛癣菌超微结构改变，结果提

3、示盐酸小檗碱明显影响红色毛癣菌形态结构。徐峥【5】等人经体外实验证实，小檗碱与氟康唑、酮康唑等抗真菌药联合应用能提高对真菌感染的疗效，可作为抗真菌药的增效剂。目前盐酸小檗碱与其他抗真菌药联合应用多为经验性用药，尚缺乏充分的实验室依据。正是基于上述原因，我们选取盐酸小檗碱纯品和临床常用的抗真菌药物以及新抗真菌药物进行体外联合药敏实验，以期为盐酸小檗碱和抗真菌药物联合应用提供实验室依据。目前皮肤癣菌药敏实验尚无统一标准，2008年美国国家临床实验室标准化协会(CLSI)制定的M38．A2方案【6】，其中包含皮肤癣菌。本研究参照该方案及相关文献进行盐酸小檗碱标准品(纯度

4、为97％)体外联合中文摘要常用抗真菌药物药物伊曲康唑，特比萘芬、氟康唑和新型抗真菌药伏立康唑、卡泊芬净对红色毛癣菌进行敏感试验，从而为盐酸小檗碱联合抗真菌药物治疗红色毛癣茵病提供实验室依据，并进一步探讨其体外联合抗菌最佳方案及最佳联合浓度，指导临床合理使用抗真菌药，有效预防和治疗红色毛癣菌引起的真菌感染性疾病提供依据。方法：1菌株来源：菌株分离自临床体癣、股癣、手足癣、甲真菌病等患者的病变处，培养并分离出30株红色毛癣菌，将菌株鉴定后接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基，28℃培养7．10天。2体外药敏实验2．1盐酸小檗碱及抗真菌药物单独药敏试验t选择生长良好的菌株，加入

5、lmL含有0．1％吐温80的O．85％无菌生理盐水覆盖试管斜面，反复冲洗培养物表面收集孢子和菌丝片段，将菌液吸至无菌试管中，混匀静置10min后去除沉淀菌丝，取上层混悬液，然后用血细胞计数板计数孢子，并调节接种物浓度在(2～6)x105。用RPMll640液体培养基将抗真菌药进行倍比稀释，配成2倍终浓度药液。药液按由高到低浓度依次加入96孔酶标板的1～lO列中，每孔100uL，菌悬配制过程中每一浓度梯度完成后应更换吸头。第11列为生长对照，加入100uLRPMll640液体培养基。取200uLRPMll640液体培养基培养基加入第12列作阴性对照。将菌悬液加入96

6、孔酶标板的1～11列中，每孔100uL，菌悬液终浓度为(2---6)x103CFU／mlcfu／mL。28℃温箱培养，培养7天判读结果。2．2盐酸小檗碱及抗真菌药物联合药敏试验t将配置好的盐酸小檗碱及抗真菌药的倍比稀释液各50uL加入96孔酶标板的l～lO列中。余操作通单独药敏试验。28℃温箱培养，培养7天判读结果。3统计方法：应用SPSSl6．0软件对数据进行统计学处理。抗真菌药物单独应用MIC值之间比较采用多样本比较的Kruskal．wallisH检验，进一步两两比较采用秩转换后单因素方差分析；各抗真菌药物联合盐酸小檗碱前后MIC值的比较采用Wilcoxon秩

7、和检验；盐酸小檗碱和抗真菌药物联合抗菌FICI值之间及各抗真菌药物不同浓度之间FICI值比较采用多样本比较的Kruskal．wallisH检验，P<0．05有统计学意义，进一步两两比较采用Nemenyi检验。中文摘要结果：1菌株耐药情况：实验选取的30株红色毛癣菌的菌株中，除伊曲康唑有耐药株外，特比萘芬、伏立康唑、氟康唑、卡泊芬净均未发现耐药菌株。伊曲康唑耐药菌株共3株，其中1株分离自股癣，2株来源不详。2单独应用盐酸小檗碱和抗真菌药物作用于红色毛癣菌药敏实验MIC值结果：盐酸小檗碱、伊曲康唑、特比萘芬、伏立康唑、氟康唑、卡泊芬净六种药物MIC值几何均数及范围分别

8、为：盐酸小