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《SNT2039-2007-地中海实蝇检疫鉴定方法PCR法.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准!"!#!"#$"!""%地中海实蝇检疫鉴定方法$%&法'()*+,-,./+,0*0-1)(,+)22/*)/*-23,+-45!!"#$%&%&'($)&%$%$"6,)()7/**#"$%&820+0.04!""%9&!9!'发布!""(9"%9"&实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局标准分享网www.bzfxw.com免费下载版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售!"!#!"#$"!""%前!!言!!本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口!本标准起草单位"中华人民共和国深圳出入境检验检疫局#中华人民共和
2、国广东出入境检验检疫局!本标准主要起草人"杨伟东#余道坚#胡学难#康林#陈枝楠#仲建忠#章桂明#徐浪!本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准!!版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售!"!#!"#$"!""%地中海实蝇检疫鉴定方法$%&法&!范围本标准规定了地中海实蝇常规!"#和$%&#'())*实时荧光!"#鉴定方法!本标准适用于进境水果#茄科蔬菜$包括番茄#茄子和辣椒等%及包装物#土壤等的检验检疫中对地中海实蝇卵#幼虫#蛹和成虫的种类鉴定!!!规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款!凡是注明日期的引用文件&其随后所有的修改单$不包括勘误的内容%或修订版均不适用于本
3、标准&然而&鼓励根据标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本!凡是不注明日期的引用文件&其最新版本适用于本标准!'&'+,,-.!分析实验室用水规格和试验方法$*)/0$12,3,%#!缩略语下列缩略语适用于本标准!#4&!'($%&!!)*&+,--.,-/0(123-$%&$%&#'())*实时荧光!"#!#4!4"#$!4-567,285.9:0-5;24-1,2<=5;<=/1-脱氧核苷三磷酸!#4#>%?!3-012.+:9,@-/./07;2;溶解曲线分析!#4'!"#酶栖热水生菌567聚合酶!#4(%AB!:715:=,53-5624/;-B细胞色素氧化酶0亚基!#4
4、)%1!1=,-;=504:7:0-循环阈值!'!原理实蝇样本$卵#幼虫#蛹或成虫%经过提取总基因组567后&利用设计的特异性引物&通过常规!"#和$%&#'())*实时荧光!"#$$'8!"#%技术&特异性扩增地中海实蝇9:567"10基因片段$2;2<=%&根据!"#扩增结果$常规!"#通过产物凝胶电泳结果($'8!"#通过扩增曲线和溶解曲线%&>标准分享网www.bzfxw.com免费下载版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售!"!#!"#$"!""%判定实蝇标本的种类是否是地中海实蝇!特异性引物是通过比对地中海实蝇与腊实蝇属中的纳塔尔实蝇#非洲芒果实蝇&按实蝇属中的加勒比按实蝇#墨西哥按
5、实蝇&以及绝大多数果实蝇的9:567"10基因片段设计出来的!(!仪器(4&!!"#扩增仪!(4!!实时荧光!"#仪!(4#!电泳仪!(4'!紫外分光光度计!(4(!凝胶成像系统!(4)!低温冰箱!(4%!冷藏冷冻冰箱!(4*!水浴锅!(4$!离心机!(4&"!电子天平!(4&&!微量加样器$?4@"A#."A#>?"A#.?"A#>??"A#.??"A#>???"A%!)!试剂)4&!实验用水$应符合'&'+,,-.中一级水的规格%!)4!!蛋白酶B$.?9C'9A%!)4#!#67消化酶!)4'!D5+7$?4@9EF'A&=G-4?%!)4(!+D$=G-4?%!)4)!>?HAEIJ
6、K*C&LMM)($电泳上样缓冲液%!)4%!AIJJ)(567NI(O)(!)4*!琼脂糖!)4$!567染色剂!)4&"!昆虫基因组567提取试剂盒!)4&&!567快速纯化'回收试剂盒!)4&!!P?Q和33433Q乙醇!)4&#!酚#三氯甲烷#异丙醇#异戊醇等有机试剂&有机试剂如未有特殊说明&均为分析醇!.R$.@99EF'A%#J6+!$.4@99EF'A%*!)4&'!!"#试剂盒)包括>?H!"#缓冲液#NC)4&(!!"#酶!)4&)!.H$%&#'())*NIS:)(NKT!)4&%!引物$>?=9EF'"A%!%!检测方法%4&!实蝇标本的前处理用于分子生物学试验的实蝇样
7、本使用前应长期冷藏在U;V冰箱!所有实蝇标本在567提取之前均要作前处理&卵#幼虫#蛹#成虫或部分组织等实蝇样本要用无菌水冲洗数遍&晾干(干标本#乙醇和福尔马林浸泡的标本先用+D$=G-4?%浸泡处理>W#.W!.版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售!"!#!"#$"!""%%C!!实蝇基因组D"?提取%C!C&!试剂盒法将实蝇样本移入>4@9A离心管或碾钵中&捣碎或加入液氮碾磨&之后实验步骤根据试剂盒的操作说
