木犀草素对某ngii诱导的人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的抑制作用与其机制分析

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1、徐州医学院硕士学位论文A●增鞠1Ir图1．AngII—ROS_主要信号通路AngII的生物学活性主要是由ATlR和AT2R介导。ATlR和AT2R相互拮抗，相互平衡。ATlR主要发挥促进细胞增殖作用【5】，而AT2R主要具有抗细胞增殖，诱导细胞凋亡等作用【6】。在病理条件下，AngII可以导致血管内皮功能障碍促进细胞有丝分裂、坏死及血管重塑等。AngII的生理病理效应主要通过与ATIR结合而发挥的，ATlR主要表达在内皮细胞、VSMCs、心肌成纤维细胞等【71。在AngII介导的高血压及动脉粥样硬化等心血管疾病的过程中，血管内皮细胞是AngII作用的重要靶

2、细胞之一。有报道，AnglI可促进内皮细胞增殖并使内皮细胞基底膜发生降解、重构、移行‘8一钔，同时AngII还可促进平滑肌细胞增殖‘们，视网膜微血管的周细胞移行H01。实验证实，血管紧张素受体拮抗剂可以显著抑制大鼠血管内皮细胞增殖、迁移和基质增生，改善内皮细胞功能⋯1。在AS发生发展过程中，AnglI促进内皮细胞和SMCs增殖和迁移，可导致斑块内新生血管形成和动脉狭窄，，并可促进其表达与分泌多种炎症细胞因子、生长因子和细胞外基质蛋白，进而促进斑块形成。由ATlR介导的这些都是AS发展过程中的重要环节。血管内皮细胞大量增殖与迁移是AS发病过程中血管新生的关键

3、环节n羽，内皮细胞的增殖和迁移可由ROS诱导酪氨酸激酶的活化而产生。AngII与ATlR结合，通过NOX产生ROS激活Src，活化的Src通过Nox途径又能促ROS产生。Src结合并活化c．Abl，使SOS．1酪氨酸磷酸化，进而活化Racl，后者对Nox的活化起主要作用。徐州医学院硕士学位论文HO·‘图2．Luteolin的结构示意图上的羟基化是其发挥生物学效应所必备的。C环上的羟基化和B环上的不饱和键对于蛋白酶体有抑制作用【291。在用氟安定处理的H印G2中，Luteolin抑制8．ohdG的形成，呈现出一定的抗氧化的作用【301。Luteolin通过抑

4、制脂肪酸合成酶的活性，抑制了前列腺癌和乳腺癌中脂肪的合成【3¨。Luteolin也能抑制LPS诱导的体内致命毒性和致炎分子的表达【321。目前【肌eolin的研究集中在肿瘤抑制方面。Luteolin通过抑制EGF诱导的酪氨酸激酶活化，阻碍过表达内皮生长因子的A43l细胞的增殖和癌症转移相关因子的表达，最终抑制肿瘤形成。Ba酉iE等研究发现LtIteolin可抑制血管内皮生长因子(vEGF)诱导的血管发生，抑制细胞存活和增殖【33】。相关研究还发现其可以通过促进肝癌细胞中STAT3的降解【蚓；通过JNK调节P53磷酸化和稳定性【351；减少HT-29细胞DN

5、A合成和细胞活力【3纠；抑制LPC诱导的内皮细胞凋亡【371；选择性阻断在肿瘤细胞中激活的糜蛋白样酶体和胰蛋白样酶体的表达【38】等诸多环节来发挥抗肿瘤作用。最近研究表明Luteolin可以抑制心肌缺血再灌注损伤时ROS的产生从而减弱心肌的损害【39】，而对Luteolin抑制AS发生和发展的研究尚处于起步阶段，其通过抑制炎症发挥抗AS作用机制的系统研究鲜见报道。大量研究证实AS是一种炎性病变，AngII能增强血管内皮细胞对ICAM．1，VCAM．1等选择素类物质的表达，后者促使血液中单核细胞和淋巴细胞在血管内皮下黏附、沉积，导致AS发生。AngII与AT

6、l受体结合后，通过激活ah通路产生大量ROS，由ROS介导的氧化应激促进了AS发生。nlteoliIl能够抑制ROS产生从而发挥抗AS的作用。徐州医学院硕士学位论文养。2．4MTT法检测不同浓度Luteolin药物浓度毒性作用(1)实验分组：J下常对照组Luteolin(6．25uM)。Luteolin(12．5uM)L，ute01in(25uM)Luteolin(50uM)(2)实验步骤：①取3．5代的对数生长期的细胞，消化、离心，10％FBS的DMEM培养液稀释细胞成3×104／ml的密度，接种于96孔板，200“吼，培养24h。②换用无血清DMEM培

7、养液，200pl／孔，培养24h，使细胞同步于静止生长期(G0／Gl期)。③LuteoliIl预处理12小时，终浓度分别为6．25pM、12．5pM、25pM、50肛M。每组设两个复孔。④MTT分析检测：细胞培养20h时每孔加入MTT(5m咖1)20pl，继续培养4h，吸净培养液，每孔加入DMsOl50pL，微量振荡器振荡约loIl：lin，酶标仪检测吸光度oD值。2．5MTT法检测细胞增殖(1)实验分组：正常对照组LuteoliIl(50pM)AngII(1州)AngII+L，uteolin(12．5pM)AngII+Lme01in(25pM)AmgII

8、+L，uteolill(50斗M)17徐州医学院硕士学位论文I苏木