caveolin1在肺癌中的表达及意义

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1、中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：——日期：中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即

2、：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：caveolin一1在肺癌中的表达及意义目U吾caveolae(胞膜窖)是细胞质膜上直径为50—100ran的烧瓶状微内陷结构，

3、它存在于成纤维细胞、内皮细胞、I型肺泡上皮等多种终末分化细胞中。caveolae中富含多种与信号传导有关的受体、激酶及连接蛋白，在信号传导通路中起枢纽作用。caveolin一1(窖蛋白一1)是caveolae重要的结构蛋白，其架构区(scaffoldingdomain，氨基端82一101位氨基酸)具有激酶抑制活性，可与存在于caveolae中的多种分子结合并调节其活性，对多条信号通路发挥调节作用。目前的研究认为cavcolin—l参与调控与肿瘤发生、发展、侵袭、转移及血管形成相关因子的活性，但不同研究小组

4、对于caveolin一1在肿瘤中发挥的作用有着不同的认识。本实验运用免疫组化、Westernblot和免疫荧光方法，观察caveolin一1蛋白在正常肺组织、肺癌组织及巨细胞肺癌细胞系中的表达情况，并探讨其表达与肺癌各临床病理因素及微血管密度(MYD)之间的关系。材料与方法1．材料：154例原发性肺癌组织及相应癌旁正常肺组织来自中国医科大学附属第一临床学院2001—2005年原发性肺癌患者外科手术切除标本，患者术前均未接受放、化疗。患者平均年龄56．97岁(26～78岁)，男女比例为2．08：1。按WHO

5、(2004)分类和国际抗癌联盟(UICC)2002年修订的P—TNM分期标准：肺鳞癌55例，I期24例，II期13例，III期18例；高分化12例，中分化18例，低分化25例；伴有淋巴结转移30例。肺腺癌60例，I期24例，Il期10例，III期23例，IV期3例；高分化21例，中分化20例，低分化19例；伴有淋巴结转移30例。大细胞肺癌13例，I期6例，II期1例，．1·、√叵遁～文一一中～一，；III期5例，IV期1例，伴有淋巴结转移7例；腺样囊性癌5例；腺鳞癌3例；类癌3例；粘液表皮样癌l例；小细胞

6、癌14例。取其中15例肺鳞癌，16例肺腺癌和5例大细胞肺癌的淋巴结转移癌(共计36例)作为配对标本进行免疫组化分析。取其中50例新鲜原发性肺癌组织(肺鳞癌、肺腺癌各25例)和13例癌旁正常肺组织标本，术中切除后立即放入一70℃冰箱保存备用。高转移能力的人巨细胞肺癌PG细胞系BEl和LH7亚系由北京大学医学部惠赠。RPMI1640培养液加入15％胎牛血清，NaHCO：浓度29／L，青霉素G浓度100U／L，链霉素浓度1001xg／ml，PH值7．2，37％，含5％CO：的湿润空气培养箱培养。2．主要试剂：兔

7、抗人多克隆anti—caveolin—l抗体(SC一894)购于SantaCruze公司，鼠抗人单克隆anti—CD34抗体(MAB一0034)、S—P超敏免疫组织化学试剂盒(KIT一9710)和DAB酶底物显色试剂盒(DAB一0031)购于福州迈新生物技术开发公司，兔抗人多克隆anti—B—actin抗体(PR一0255)、FITC标记山羊抗兔抗体(ZF一0311)购自中山生物技术有限公司，辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗(IE0031)购自华美公司，核染色试剂DAPI(236276)购自Roche公司，

8、RPMI1640培养液、胎牛血清购自GiBCO公司。3．实验方法：3．1免疫组化：标本用中性福尔马林溶液固定，石蜡包埋，制成41xm连续切片，经脱蜡，脱苯，水化后，行抗caveolin一1(1：125)和抗CD34免疫组织化学染色，染色方法按链霉素抗生物素蛋白一过氧化物酶(S—P)法试剂盒说明书步骤进行。caveolin一1在血管内皮细胞和肺泡上皮细胞为阳性染色，作为内部阳性对照。以PBS代替一抗作为阴性对照。结果判定：cav