芬太尼、瑞芬太尼和舒芬太尼对人脐血树突状细胞免疫功能的影响

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1、t．卜●、Jp0目录J．IJll，／lIJITllrrlllrllJlifrTrIiIllY1779884中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文芬太尼、舒芬太尼或瑞芬太尼对人脐血树突状细胞免疫功能的影响前言⋯⋯⋯···⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“一”⋯”一””．．”“，⋯⋯⋯⋯一·7刖吾“一”””””一“““““””“”一”一““⋯一””””““””“”⋯“一一‘7一资料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯7结果······⋯···········⋯····················································～·1l附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯oeoeoeooeoo⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯···18讨论········⋯⋯·················································⋯⋯·········20结论·····················⋯·

3、········⋯·················⋯······················22参考文献⋯⋯OO010OO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23综述瑞芬太尼药理学、临床应用及对免疫功能的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26致谢·····················⋯·····················⋯⋯⋯“．．“⋯．．．．””””一⋯一一37个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38中文摘要芬太尼、瑞芬太尼和舒芬太尼对人脐血树突状细胞免疫功能的影响摘要目的

4、：本研究旨在探讨等效价镇痛和抑制切皮反应浓度【l】芬太尼、瑞芬太尼和舒芬太尼对脐血树突状细胞(DCs)免疫功能的影响。方法：无菌条件下采集健康孕妇正常胎儿脐带血70ml左右，肝素抗凝。在超净工作台上用生理盐水：脐带血为1：1的比例稀释后，再把稀释血与淋巴细胞分离液按2：1的比例缓缓加到淋巴细胞分离液上层，密度梯度离心法获得脐血单个核细胞(CBMC)，将细胞用生理盐水清洗3次后弃上清加入无血清培养基计数单个核细胞。调整细胞数量为2×106／ml，接种于24孔培养板中，每孔2ml。在37℃、5％C02

5、培养箱中孵育2h，移去悬浮细胞，无血清培养基轻轻洗涤两次，以去除残留非贴壁细胞，保留贴壁细胞，调整细胞数量为1×106／ml。加入细胞生长因子：重组人类粒细胞集落刺激因子(rhGM．CSF)50ng／ml，人类白介素一4(rhIL．4)10ng／ml。然后分组进行培养：常规培养组作为对照组(N组)、芬太尼组(F组)、瑞芬太尼组(R组)、舒芬太尼组(S组)。N组：、常规加入rhGM．CS、rhlL-4及重组人类肿瘤坏死因子一Q(rhTNF．Q)培养14d。F组：培养的同时加入芬太尼浓度分别为(1、5

6、)ng／ml(FI组、F5组)；R组：加入瑞芬太尼浓度分别为(1、5)ng／m1(Rl组、R5组)；S组：加入舒芬太尼浓度分别为(O．1、O．5)ng／ml(So．1组、So．5组)。倒置显微镜观察其形态学变化。采用流式细胞分析仪对各组DCs免疫表型CD80、CD86、CD83、HLA—DR(主要组织相容性复合体MHC．11分子之一)分子的表达进行分析，用双抗体夹心免疫(ELISA)法检测培养上清中IL一12的水平。取健康志愿者外周血20ml，同上述方法制备外周血单个核细胞(PBMC)，加入含有l

7、O％小牛血清的RPMll640培养液，在培养箱中培养2h，收集悬浮细胞作为同种异体混合淋巴细胞，调整细胞数量为2．0x106／ml，用RPMll640培养基培养7d。培养后的细胞作为反应细胞，各组DCs作为刺激细胞，共同培养3d用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测经DCs刺激后混合淋巴细胞的增殖能力。中文摘要结果：1观察芬太尼、瑞芬太尼和舒芬太尼对DCs形态的影响：细胞培养24h后在倒置显微镜下观察各组DCs可见少量悬浮细胞，但大部分仍贴壁生长并聚集成簇；培养5d后对照组细胞形成明显的集落，药物组中瑞

8、芬太尼5ng／ml(R5)组集落形成小且数量也少；培养14d后细胞体积增大可见典型树突样突起，而瑞芬太尼5ng／ml(R5)组细胞树突状伪足不明显，且有典型树突样改变的细胞数量也少(见Fig．1～4)。2芬太尼、瑞芬太尼和舒芬太尼对DCs免疫表型的影响：表面标志物CD80、CD86、CD83和HLA—DR分子的表达在对照组和Fl(芬太尼lng／m1)组比较无明显差异(尸>O．05)；Rl、So．1、与Fl组比较其表达明显降低俨