杀灭鱼类指环虫天然植物药的筛选与其活性部位和活性成分研究论文

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1、摘要【目的】寻找杀灭鱼类指环虫杀虫活性较高的植物源药物，并进行其活性部位的筛选、杀虫活性成分的初步跟踪、分离和鉴定。【方法】1．对20种植物进行杀灭指环虫的效果实验，确定杀虫活性较高、对鱼相对比较安全、且用量也相对较低的独活作为进一步的研究对象。2．制备感染指环虫的金鱼模型。分别用石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇提取独活的有效成分，并检测其杀灭指环虫的生物活性。根据其杀虫效果来确定最佳的活性部位。3．采用柱层析分离结合活性跟踪的方法，通过并结合物理常数、薄层色谱(TLC)、气相色谱—质谱((配一MS)、一般化学定性实验等对其进行分类鉴定。【结果】1．在20种植物中，对指环虫的最高

2、杀灭率依次为：独活为100％；除虫菊为90％；两面针、木通、苦树皮为80％；走马芹、半边莲、吐根、委陵菜为50％；草果、延胡索、藜芦、断肠草、白芷、山柰为30％一10％：在1000mg．L。1范围内，大风子、相思子、仙茅、水黄连、雷打草、瓜蒌没有明显杀虫活性。最佳杀虫浓度从低到高依次为：木通为30mg．L～；独活为120mg．L～；白芷为150mg．L～；走马芹为200mg．L～；除虫菊为240mg．L～；两面针为350mg．L～；藜芦为400mg．L～；苦树皮为500mg．L～；延胡索为600mg．L～；草果为700mg．L～；山柰、断肠草、半边莲、吐根为800mg．L～。

3、在测试浓度范围内，能够导致试验金鱼在48h死亡的如表2-2所示，其中相思子、瓜萎、断肠草、半边莲、吐根、委陵菜在1000mg．L-1时，试验金鱼仍然未见有死亡现象。2．独活杀灭指环虫活性部位：乙醇提取物的最佳杀虫浓度为120mg．Ld(按生药计)，杀虫率为100％；丙酮提取物最佳杀虫浓度为70mg．Ld(按生药计)，但最高杀虫率为72．O％；乙酸乙酯提取物的最佳杀虫浓度为300mg．L．1(按生药计)，最高杀虫率只有64．8％；而石油醚提取物的最佳杀虫浓度为100mg．L-1(按生药计)，最高杀虫率仅为49．1％。3．根据2可知乙醇提取物对指环虫具有最佳杀灭效果。采用硅胶柱层

4、析法，以石油醚．乙酸乙酯(40：1、30：1、20：1、10：1、5：1、2：1、1：1、0：1)，乙酸乙酯．甲醇(100：1、50：l、20-1、10：l、5：1、3：1、2：1、l：l、O：1和水洗柱)作为洗脱系统，进行梯度洗脱，TLC检测，得到16个流分组A～P，经药效测定F流分和K流分组具有U＼＼涨删杀虫活性，且F流分为结晶体，TLC检测为单点。以氯仿．甲醇(50：l，25：1，10：1，9：1，8：1，7：1，5：1，3：1，2：1，1：l，甲醇和水洗柱)作为洗脱系统，对K流分组进行硅胶柱层析分离，得到11个流分组Kl～Kll，经药效测定Kl流分组具有杀虫活性。以石

5、油醚．乙酸乙酯(1：0、50：1、20：1、10：1、5：1、2：1、l：l、0：1、甲醇)作为洗脱系统，对Kl流分进行硅胶柱层析分离，得到6个流分组K1．1～Kl_6，其中经药效测定KI．1和K1．2具有杀虫活性，且K1．1为油性成分。以石油醚一氯仿(6：4、6：5、6：6、6：7、氯仿)作为洗脱系统，对Ki．2进行梯度洗脱，得到4个流分组K1-2．1～Kl-2-4，其中K1．2．3具有杀虫活性，且为结晶物质，TLC检测为单点。F和K1．2．3的活性测定结果显示，F48h的100％杀指环虫浓度为1．6mg．L～：Kl_2_348h在浓度为5mg．L‘1时，对指环虫的杀灭率为

6、74．4％；KI-148h在浓度为20mg．L。1时，对指环虫的杀灭率为51．9％。【结论】通过对独活乙醇提取的活性化合物，进行熔点测定，并结合薄层色谱、气相色谱一质谱(GC．MS)、一般化学的定性实验等对其进行分类鉴定。F鉴定为蛇床子素、Kl-2．3鉴定为香豆素类成分，K1．1鉴定为油性混合物成分。关键词：指环虫；天然植物；香豆素III50％；Amomuntsao—koCtevose．etLemaire，Corydalisyanhus，VeratnmmigrumL，Gelsemiumelegans，Angelicadahuriea(Fisch．exHoffrn)Benth．

7、etHook．DandKaempferiagalangalL．10％--30％；theothertestedsampleshadnotshownobviouskillingactivitiesinexperimentalconcentrationof1000rag．L．1．Theoptimizationkillingconcentration：Akebiaquinata(Thunb)．Dencewas30mg．L一；RadixAngelicaePubeseentiswas120mg．L一：Angelic