家族性良性慢性天疱疮atp2c1基因突变研究

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1、●山东省医学科学院顿十学位论文学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文中引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。．学位论文知识产权权属声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属山东省医学科学院。山东省医学科学院享有以任何方式发表、复制、公开阅览、借阅以及申请专利等权利。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位仍然为山

2、东省医学科学院．论文作者签名：叠盘霪导师签名：●山东省医学科学院碗I：学位论文家族性良性慢性天疱疮ATP2C1基因突变研究研究生颜潇潇导师张福仁研究员一一i摘要背景：家族性良性慢性天疱疮(FamilyBenignChronicPemphigus)，是一种常染色体显性遗传性皮肤病，由Halley兄弟1939年首次报道，因此也称Hailey．HailcyDisease(HHD)。临床表现以正常皮肤或红斑基础上出现成群的小水疱或大疱为主要特征．皮疹易发生于颈、腋窝、腹股沟、脐周、胭窝、肛周等易摩擦的部位。19”年Rich

3、ard等通过基因连锁分析将HHD定位于3q21-24。2000年Hu．等和Sudbrak等通过定位克隆的方法证实HHD是由ArP2Cl基因突变所致，该基因编码一种P．型Ca2*ATP酶，即人类分泌途径Ca2+／Mn2+ATP酶(humansecretarypathwayCa=+transportATPases，hSPCAl)．人角质形成细胞SPCAl位于高尔基体内，转运Ca'+或Mn2+，控制着高尔基体内钙离子，锰离子的储存。当ATP2C1基因发生突变，使SPCAl泵功能异常，转运钙离子的功能下降，使高尔基体腔内钙

4、离子浓度降低。高尔基体腔内钙离子浓度的降低可能削弱了重要蛋白质的糖基化、水解、折叠、转运或分选过程，如桥粒蛋白等，影响桥粒的完整性，使表皮细胞产生裂隙，出现相应的临床表现。目前，文献报道该基因有80余种不同的突变位点，突变类型有错义突变、无义突变、移码突变和剪切位点突变。国内朱学骏和台湾学者等分别对7个和6个HHD家系进行突变检测，发现了4个和5个未报道的新突变。本课题研究的14个家系和3个散发病例均来自山东地区，临床表现轻重不同，对其基因进行研究，有助于阐明其病变的分子机制，并为将来的基因诊断，产前诊断及基因治疗

5、等提供理论依据。目的：(1)寻找17个先证者及其家族中病人的ATP2C1基因突变位点。(2)探讨病人的临床表现和基因突变的特点，寻找基因型．表型之间的关系。方法：获得病人知情同意后，抽取先证者和家庭成员中所有病人的外周全血，EDTA-Kz抗凝。用QIAGEN公司DNA提取试剂盒提取基因组DNA．设计27对引物。PCR方法扩增出ATP2C1基因28个外显子．PCR产物经凝胶电泳检测，经虾碱酶纯化，用单条测序引物进行测序反应。再经乙醇沉淀后，应用DNA测序仪进行测序，直接检测ATP2C1基因存在的突变位点。正常对照组取

6、自复旦2●山东省医学科学院硕卜学位论文大学遗传所保存的120份正常人DNA样本。结果：分别在8个家系和1例散发病人基因中检测到突变位点．有2个家系拥有相同的基因突变位点．寻找到的8种突变型均是未曾报道过的。包括3个缺失突变(m14(54-1487／q462．1485del．，1523delAT,2375delTrGT)，3个剪切位点突变(360．2a一岛1415·za-c,224a+Et-c),2个错义突变(P307L和D648v)，120个正常对照中均不存在上述突变。结论：3个缺失突变(ntl464-1487／1

7、462．1485del，1523delAT,2375delTTGT)，3个剪切位点突变!(360-2a—g,1415-2a--c,2243+2t--c)，2个错义突变(P307L和D648Y)是HHD新的ATP2C1基因突变。关键词：家族性良性慢性天疱疮，ATP2C1基因，基因突变，直接测序3■●山东省医学科学院碘I。学位论空StudyonthemutationsofATP2CIgeneinthePatientswithHailey-HaileyDiseasePostgraduateYanXiaoxiaoTutor

8、Prof．ZhangPurenAbstractBackground：FamilyBenignChronicPemphigus，arareautosomaldominantlyinheriteddermatosiswasfirstlydescribedin1939byHaileybrothersandisalsoknownasHaiicy—HalIcydise