利用多种途径进行海南龙血树种质创新

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1、摘要本试验以龙血树幼嫩茎段为材料，通过对龙血树幼嫩茎段两步培养法再生的研究，建立了龙血树幼嫩茎段离体再生体系，证明了愈伤组织的发生和激素种类与浓度的关系；并在此基础上研究了愈伤组织再生对不同人工诱变方法(60Co辐射、EMS、秋水仙素)的反应、被处理愈伤组织再生能力和再生植株性状多样性、以及再生植株不同生理角度(外观性状、细胞学)的变异性，得到了2株变异株系。并从龙血树商业种植苗圃罩选择出11种变异类型。(1)首次对海南龙血树进行了种质创新途径的研究，田间自然变异的选择是目前最为有效的途径，组织培养分别培结合EMS、60Co辐射和秋水仙的诱变途径也是有效

2、果的。田间实生群体自然变异可高达20％，已发现有1l中种变异类型，其中LXZ09类型的变异率高达8％。EMS诱变途径中，浓度为2．O％的获得最高的微核率(15．6‰)，EMS浓度为2．O％处理时间为4h的组合使材料达到半致死；细胞学的观察看到了单微核、双微核、三微核、染色体桥、滞留染色体和合胞体等染色体畸变现象，再生苗中发现了1棵变异株。60Co辐射的诱变途径中，20Gy的剂量使不定芽半致死，再生苗中发现了1棵变异株。秋水仙素诱导多倍体途径中秋水仙素浓度0．5％，处理时间5d的处理组合能获得较高的多倍率，多倍率为25％。(2)首次获得了海南龙血树新种质1

3、3份，并较为系统地对11份自然变异的种质进行了植物学性状观察，其中6份材料具有成为龙血树新品种的潜力。这11份资源中，LXS01、LXS02、LXS03、LXS04、LXS06、LXS07这几份材料具有成为龙血树新品种的潜力。(3)首次鉴定了海南龙血树的染色体数目，构建了海南龙血树根尖体细胞染色体制片技术。其技术要点是于上午9时～10时采集根尖，用饱和的对二氯苯预处理6h，固定4～18h，置于1mol／L稀盐酸在60℃恒温水浴酸化6min，置载玻片切片后用改良石炭酸品红染色30mm，敲片后显微观察。鉴定了海南龙血树染色体数目(2n=42)。(4)初步构建

4、了基于组织培养的海南龙血树诱变复合技术体系。再生体系技术要点是愈伤组织的诱导培养基为MS+6一BA6．0mg／L+NAA0．5m叽，诱导率可达62％：增殖培养基为MS+6一BA5．0mg／L+NAAO．5m∥L，经4周培养，愈伤组织增殖率可达9．6；分化培养基为MS+6一BA5．Omg／L+NAA0．1m∥L；生根培养基是MS+NAAO．3m∥L+AC1g／L，生根率为100％。再生体系结合EMS复合技术体系的要点是浓度为2．O％的EMS处理生长旺盛的愈伤组织时间为4h，后进行分化和生根培养。再生体系结合60Co辐射复合技术体系的要点是20Gy的剂量辐射

5、生长旺盛的愈伤组织，后进行分化和生根培养。再生体系结合秋水仙素复合技术体系的要点是浓度为O．5％的秋水仙素处理生长旺盛的愈伤组织时间为5d，后进行分化和生根培养。体关键词：龙血树；诱变；组织培养；种质创新；EMS；60Co；秋水仙素；染色IIAbstractInthepresentexperiment，thetenderstemsofD阳c船挖口∞珑60扔口舱口wereusedasexplantstoestablishat、Ⅳo—steptissuecultureandregenerationsystem．Thee丑’ectsoftypesandconc

6、entrationsofplantho咖onesonmeinductionofcalluswerestudied．Basedonthese，thereaCtionsofcallusregenerationtodia’eremmutation—inducedapproaches(60Coirradiation，EMSandcolchicines)，theregenerationabilit)rofthetreatedcallusaSweUaSthecharacterSdiVersities(includingthe印pearancetraitsandcyt

7、0109icalobservations)oft11eregeneratjonplantswereinVestigated．Asaresuh，twomutamswereobtained丘nally．Inaddition，11mutantswerealsochosenfomlacommercialnurSery．Thema主nresultsareasfollows：1．nwasthefirSttimetoconductresearchonthegemlpIaSminnovationofD阳c口P门口c口聊6D疣口船口．Selectionofnaturalv

8、ariationinthefieldisthemoSte讯：ctiveappro