成年大鼠乳腺不同发育时期乳腺上皮小亮细胞cd24的免疫组化研究

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1、硕士学位论文成年大鼠乳腺不同发育时期乳腺上皮小亮细胞CD24的免疫组化研究硕士研究生：曾小芳指导老师：安靓教授摘要啮齿动物的乳腺上皮首先出现于乳腺带，一种可以形成未来腺管系统的上皮性芽胚。3周后，受性激素的刺激，腺管系统进入脂肪垫并形成分支，称为终末芽胚，为乳腺导管生长的起始点，是一层由杯状细胞包绕的体细胞团。随着导管伸展和终末芽胚的发育，体细胞形成导管内部腔上皮层，而杯状细胞形成外部的肌上皮层。形成导管腔的过程中，体细胞通常会发生凋亡，而杯状细胞也会进入体细胞层，因此认为杯状细胞是干细胞的来源【

2、lJ。成熟乳腺也可能存在具有干细胞功能的细胞。在啮齿动物，妊娠中会出现细胞迅速增殖，导致大量像葡萄串一样的分支和分泌泡形成。在分泌泡中，腔上皮产生乳汁，而肌上皮通过收缩将乳汁从分泌泡挤入导管。一旦断乳，这些结构通过凋亡而消失，像未妊娠一样，脂肪垫中的导管结构也变得相当稀疏。此循环在动物一生中经历多次。仅仅干细胞的增殖潜能可以维持上述过程；因此提示存在暂时性干细胞【2】，受到性刺激之前，这些细胞处于静止状态。而且不完整的过程也见于动情周期中。相同的循环也见于人类的妊娠和月经周期中，但在增殖程度上存在

3、一定差异。此外，乳腺日常的细胞更新过程中，成熟的乳腺干细胞(mammarystemcells，MaSCs)也可能发挥一定作用。因为在哺乳过程中，乳汁中存在脱落的上皮细胞。脱落进入导管系统的细胞必须以一些方式进行补充，否则上皮细胞的数目不能维持整体性；具有这种功能的细胞可能为具有持续活性干细胞。所以对成熟的乳腺上皮，干细胞至少具有明显不同的两种功能，即暂时性或持续性干中文摘要细胞【3】。虽然乳腺组织中存在干细胞，但目前尚缺乏特异性的乳腺干细胞标记物，许多学者应用了包括乳腺球培养、5．溴基一2一脱氧．

4、尿苷(BrdU)标记法、细胞表面标记如干细胞抗原l(Sca-1)和CD49f,Hoechst染色等一系列方法来鉴定乳腺干细胞。特别是基于表面抗原的MaSCs的表型分析是研究干细胞生物学特点和有效选择MaSCs进行临床移植治疗的一个关键技术，目前MaSCs表面抗原的分析技术已广泛用于细胞亚群的分离，其中Sca．1分子是最常应用的MaSCs筛选标记。但是近几年来已有资料证实了Sca-1"-MaSCs的存在，Stingl0,5】等利用流式细胞术分选出的CD49f／Sca一1M乳腺上皮细胞在移植实验中并不

5、会形成聚落，而CD49f／Sca-1沁w在清洁脂肪垫中却有很强的重建能力，且具CD491一-表型的乳腺上皮细胞，经培养后最终都会表达Sca-1，说明Scal"-MaSCs可能l：l'．Scal+-MaSCs更为原始。Alvi等16】在研究乳腺侧群细胞(用Hoechst染料和流式细胞术进行造血干／祖细胞分离时发现了一群特殊细胞称为侧群细胞，它具有类似干细胞的自我更新和多向分化潜能，被认为是一种普遍的干细胞表型。)时发现，SP和Non．SP有相近的克隆形成能力，尽管其所含的Sca-1+细胞的比例有显著

6、差异(15．8％Sca-1inSPand1．8％Sca．1innon．SPcells)。因此，很有必要寻找新的特异性更强的干细胞表面标记。一个新的抗原CD24i子l起了人们的关注，最近，Shackleton等15]将乳腺组织制成单细胞悬液，经流式细胞仪筛选出具有特殊表面标志的细胞并注入LacZ转基因小鼠体内，结果发现所有接种Lin’CD29hiCD24+细胞的小鼠在10周内均形成明显的克隆。虽然有关的研究尚不甚深入，但其应用前景诱人。在小鼠和大鼠乳腺导管和腺泡中，存在一种形态特别的上皮细胞。光镜下

7、这种细胞胞体较小，呈圆形，胞核强嗜碱性，圆形居中，核质比大，胞质含细胞器少，胞质透明，清亮，被称作小亮细胞，类似的亮细胞也见于人类乳腺中。目前普遍认为，此小亮细胞可能代表了MaSCs。我们以成体大鼠为模型，运用组织学、免疫组织化学和光镜检测技术，研究了成体大鼠乳腺组织的发育规律，以及周围组织的发生演变：成体大鼠乳腺组织中CD24[jfl性小亮细胞表达量和表达部位的变化，行Kruskal—Wallis检验法作组间比较，Nemenyi法行组间两两比较，II硕士学位论文取检验水准Et----O．05。各

8、部分实验结果如下：第一部分：成体大鼠乳腺不同发育时期的形态学研究HE染色方法观察3月龄未孕、孕13天、产后7天、产后21天四个时期的大鼠乳腺组织。实验结果显示，未孕3月龄和产后21天乳腺组织大都为结缔组织和脂肪组织，上皮性导管和腺泡很少，孤立或成簇地散在于脂肪或结缔组织中。位于腺泡或导管内，有一种胞体较小的小亮细胞，它们分布于乳腺导管及腺泡的基底膜上或肌上皮与腺上皮细胞之间。它们与相邻细胞分界明显，未见其暴露于管腔或腺泡腔面。孕13天和产后7天的乳腺上皮细胞在乳导管基质中广泛增殖，