p物质在急性胰腺炎相关肺损伤中的作用

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容裰关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签撕通迎导师签名：彤参学院领如#钐年5胃研究生学位论文独创性声明本论文是在导癖指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文孛不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指

2、导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：霜是迎导师签名：≯乞句沙∥孑年多男吖蹬中文摘要P物质在急性胰腺炎相关肺损伤中的作用摘要急性胰腺炎(acutepancreatitis，AP)是临床上常见的急腹症之一，特别是重症急性胰腺炎(severeacutepancreatitis，SAP)并发症多，预后凶险，病死率可高达30％～40％。急性肺损伤及其终末阶段急性呼吸窘迫综合征(acuterespiratorydistresssyndrome，ARDS)是AP最常见而严重的并发症，为临床SAP病人死亡的重要原因之一。神经激肽P物质是神经源性炎

3、症反应中的重要介质，在免疫反应中亦起着重要作用。近年来，P物质在AP与其相关性肺损伤中的作用已被人们认识，并逐渐引起重视。已知P物质是一种舒血管物质，能增加血管通透性，导致血浆渗出与水肿。P物质能够诱导白细胞黏附与浸润，还能调节多种细胞因子的产生并与T细胞增殖，B淋巴细胞产生抗体及单核巨噬细胞与肥大细胞释放炎性介质，多形核白细胞呼吸爆发等功能作用相关。P物质主要是通过与相应神经激肽受体(neurokinin．1receptors，NK．1R)结合，介导G蛋白偶联的第二信号途径而发挥作用的。研究发现，在AP过程中，P物质释放明显增加，其相应NK一1R表达亦明显增

4、加。反映肺组织血浆、炎细胞渗出程度的肺湿／干重率明显增加，作为反映中性粒细胞聚集程度指标的髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)活力亦明显增强。Lau等发现在雨蛙肽诱导的小鼠急性胰腺炎模型中通过腹腔给予P物质受体中文摘要拮抗剂CP．96，345可以降低血清淀粉酶水平，减轻胰腺与肺组织的水肿、出血、炎细胞浸润等病理损伤，降低MPO活性，降低微血管通透性，从而为AP相关性肺损伤的治疗提供一新的途径。目的：本研究通过建立大鼠AP模型，并施予P物质受体拮抗剂L．703，606干预，观察肺组织的湿／干重比率，MPO活性，病理改变及P物质与NK．1R的表达

5、情况，探讨其在AP炎症反应中的作用，探讨L一703，606对实验性AP的治疗作用及机制。方法：1动物模型的制备：选取雄性大鼠，以10％水合氯醛腹腔注射麻醉，取上腹正中作切口进入腹腔，用4号加工钝头头皮静脉针头于十二指肠乳头附近逆行插入胰胆管，以O．2ml／min速度注入5％牛磺胆酸钠(O．1ml／1009)，推药后捏闭胰胆管入十二指肠处，观察3min，剪除除结扎线，关腹。2实验分组：将雄性Sprague—Dawley大鼠54只，随机分为假手术组(SO组，n--18)、急性胰腺炎组(AP组，n=18)、急性胰腺炎治疗组(肿+L．703，606组，n=18)，后又

6、以不同时间点3h、6h、12h分为三个亚组，每个亚组为6只大鼠。AP+L一703，606组于不同时间点造模前15min经尾静脉预防性注射L一703，606(250nmol／kg)。3肺组织湿／干重率测定：取左肺叶，以吸水纸吸干表面液体，称取湿重，置于60。C烤箱烤72h至恒重，称取干重，计算湿／干重比率。4生化指标测定：取血清样本，采用全自动血清生化中文摘要分析仪检测血清淀粉酶、脂肪酶，由河北医科大学第二医院生化室协助测定。5胰腺、肺组织学检查：采用石蜡切片，HE染色。6MPO活力测定：取肺组织制成组织匀浆，用化学比色法测定，具体操作按南京建成生物工程研究所提

7、供的测试盒说明书进行。7免疫组织化学染色：脱蜡至水，抗原热修复后，用3％过氧化氢孵育15min。封闭一抗4。C过夜，阴性对照用PBS代替一抗。先后滴,Di]-．抗、三抗各15min，后用3，3．二氨基苯联胺(DAB)显色，复染后封片。以细胞浆内呈现黄褐色颗粒为阳性表达。8westernblot：100mg肺组织经超声细胞粉碎机彻底粉碎，加入1ml细胞裂解液，充分裂解，提取NK．1R膜蛋白(具体操作按说明书)，取20∥g与上样缓冲液充分混合，置于SDS变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，转移至NC膜，以5％的脱脂奶粉封闭，一抗(1：250)4。C孵育过夜，以相应的二抗室温下

8、孵育2h，抗体检测按SantaCruz