灰树花子实体多糖的分离纯化与免疫活性的的研究

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1、西南大学硕士学位论文糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖的Q．吡喃型中性杂多糖，灰树花多糖GFP75．2D是含有岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖的呋喃型中性多糖，灰树花多糖GFP75．3C1是含有岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸的酸性多糖，灰树花多糖GFP75-4B是含有岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖的中性多糖。第三部分，灰树花子实体多糖的免疫活性研究。运用活性追踪的方法，利用巨噬细胞分泌NO实验和小鼠淋巴细胞增殖实验追踪检测了分离纯化过程中得到的各个组分的免疫活性。粗多糖GFP

2、75经体外刺激巨噬细胞分泌NO实验和刺激小鼠淋巴细胞增殖实验证明，其具有一定的体外免疫活性；通过体外细胞实验，发现粗多糖GFP75—1、GFP75．2、GFP75．3、GFP75-4、GFP75．5和GFP75．6均有免疫活性，其中，OFP75-2、GFP75．3和GFP75-4对巨噬细胞和淋巴细胞皆具有免疫活性，对这三个组分进一步纯化获得的四个均一多糖中，除灰树花多糖GFP75．2C外，均有免疫活性，与相应的DEAE离子柱组分相比，灰树花多糖GFP75．2D刺激巨噬细胞分泌NO活性显著提高，灰树花多糖GFP75

3、．3C1刺激巨噬细胞分泌NO活性和刺激淋巴细胞增殖活性稍有提高，灰树花多糖GFP75-4B刺激巨噬细胞分泌NO活性有所降低。第四部分，灰树花均一多糖GFP75．2D对巨噬细胞的活化作用研究。选取体外免疫活性显著的灰树花均一多糖GFP75．2D，研究了其对巨噬细胞免疫的活性机制。采用Griess法测定了灰树花多糖对巨噬细胞NO释放量的影响，酶联免疫吸附法(ELISA法)检测了灰树花多糖对巨噬细胞分泌细胞因子的影响，RT-PCR法检测灰树花多糖对巨噬细胞表达相关细胞因子mRAN表达量的影响。研究发现，灰树花多糖GFP

4、75—2D对巨噬细胞有活化作用，刺激细胞体积变大，形成伪足；与阴性对照相比，灰树花多糖GFP75．2D处理后的RAW264．7细胞NO释放量显著增加，并且NO的释放量与灰树花多糖存在剂量依赖性；与未经样品刺激组相比，灰树花多糖GFP75-2D处理后的RAW264．7细胞分泌的TNF．Q、IL．1B和IL．6等细胞因子的量明显增多，同时TNF—a、IL．1B和IL．6等细胞因子mRNA的表达量也增多。表明灰树花多糖GFP75．2D能够多途径激活巨噬细胞，增强巨噬细胞的生物活性，具有良好的免疫增强作用。关键词：灰树花

5、多糖分离纯化免疫活性ⅡAbstractIsolation，PurificationandlmmunomodifyingActivityofPolysaccharidesfromtheFruitbodiesofGrifolafrondosaMaitake(Grifolafrondosa)isapolyporemushroomthatgrowsinclustersatthebaseoftreesintemperateforests．ThefungusisnativetomanyprovincessuchasHebei

6、，Zhejiang，Sichuan,JilinandFujianinChina．Greatattentionshavebeenpaidtoartificialcultivationofthisrareedibefungiforover30yearsinZhejiangandHebeiprovinceduetoitsdelicioustastesanduniquearoma．Itisalsoprizedasamedicinalmushroomrichinavarietyofactivesubstances．Gfro

7、ndosapolysaccharide，mainactiveingredient，hasbeenidentifiedtohavesignificanteffectsinimmtmity-improving，anti-tumor,anti-hypertensive，anti-diabetic，anti-hyperliopisis，aswellasmanyotherpharmacologicalactivities．Inthisstudy,crudepolysaecharideswerepurified,andthe

8、ntheiractivitiesweretested．Inaddition,structuresofpurifiedpolysaecharideswereanalyzedusingchromatographicandspectroscopicmethods．Furthertestswerealsoimplementedtoevaluatetheilnnluneactivi