不同培养方式长期扩增神经干细胞的比较

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1、人连理工大学硕士学位论文摘要神经干细胞的体外培养方式有神经球悬浮培养和单层贴壁培养两种。为寻求适合体外大规模扩增的培养方式，本研究对悬浮和单层贴壁方式培养的神经干细胞进行了系统的比较。首先从E14小鼠胚胎前脑组织中获得了细胞，经Aeeutasew消化和机械吹打后形成单细胞悬液，分别以悬浮和单层的方式进行培养。经诱导分化和免疫荧光鉴定．两种培养方式培养的细胞均为神经干细胞。进而分别取体外培养时间为2l天、56天以及113天的悬浮和单层培养的细胞，通过荧光染色、免疫荧光以及流式细胞术等检测方法对其生长状态、增殖能

2、力及异质性进行了比较。结果显示，通过两种不同培养方式获得的神经干细胞都能在长期的体外培养过程中保持良好的生长状态，但其增殖能力存在差异：在体外培养的21天和56天，单层贴壁方式培养的神经干细胞的增殖能力要强于悬浮方式培养的神经干细胞，而在体外培养的113天两种培养方式培养的神经干细胞的增殖能力则无显著的差别。在长期的体外培养过程中悬浮方式培养的细胞中Nestin阳性细胞所占的比例要高于单层贴壁方式，而单层贴壁培养的细胞中[jmbulinIII阳性细胞的比例则要高于悬浮培养方式的细胞。此外，本文还确定了悬浮培养

3、的神经球在直径2001ira时进行传代为传代的合适时机。进一步阐明了悬浮和单层培养方式所培养的神经干细胞在增殖能力及异质性等方面都存在着差异。对于体外大规模扩增神经干细胞而言，悬浮培养方式要优于单层贴壁培养方式。关键词：神经干细胞；悬浮培养；单层培养不同培养方式长赣扩璜}}经干细胞的阮较ComparisonofDifferentCultureModeforLong-termExpansionofNeuralStemCellsAbstractNeuralstemcells附SCs)canbeculturedin

4、twomodesofsuspensionandmonolayermvitro．Inordertofindtheappropriatemethodsforla玛e_scaleexpansionofNSCs，wecomparedtheNSCsculturedinsuspensionwiththoseculttwedinmonolayersystematically．Firstly,thefombralntissuewasremovedfromtheembryonicday14∞14)mice,thenthetis

5、suewasdissociatedintosingle-cellsuspensionbyAccutaseTMandmechanicaltrituration．Thecellswg；eculturedinIxahsuspensionandmonolayer．Thecellsculturedinsuspensionandmonolayerwereidentified协beNSCsbytheassayofdifferentiationandimmunofluorescence．Furthermore，theNSCs

6、culturedinsuspensionandinmonolayerwerecomparedOilviability,abilityofproliferationandheterogeneitybyfluorescentdye，immunofluorescenceandFACSonDIV21，DIV56andDIVl13respectively．TheresultsindicatedthattheNSCsculturedinbothsuspensionandmonolayerrepresentedgoodvi

7、aU：iVinlong—termculture．Buttheydisplayeddistinctabilityofproliferationinlong—termculture．TheNSCsculturedinmonolayerprecededthoseculturedinsuspensionOntheabilityofproliferation0nDIV21andDIV56，butnOobviousdifferenceonDIVt13．TheNSCspopulationculturedinsuspensi

8、ondisplayedmoreNestin-positivecellsthanthoseinmonolayerinthewholeprocessesofculture．TheNSCspopulationculturedinmonolayer,however,displayedmoret3tubulinlII-posifivecellsthanthoseinsuspensionintheSameper