黑米花色苷对ccl4诱导小鼠肝损伤保护作用与其抗氧化机制

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1、华中农业人学2009屙硕L学位论文，摘要近20年来，评价和筛选具有强抗氧化活性的天然资源已成为生物学、医学和食品科学研究的新趋势。黑米作为重要的优异稻种资源，因其糙米(颖果)果皮和种皮内富集有天然花色苷化合物，是开发天然抗氧化剂的重要来源。自由基是造成肝脏损伤的一个主要因素。目前，肝损伤的防治仍是一个全球性的严峻课题，筛选保肝药物或食物具有十分重要的现实意义。本实验室发现黑米花色苷有较强的清除自由基作用，因此本文在探讨了黑米花色苷(Blackriceanthocyanins，BRA)分离纯化工艺的基础上，采用HPLC法鉴定了其主成分，通过建立亚急性小鼠肝损伤模型，探讨了BRA对四氯化碳(c

2、cl4)诱导小鼠的肝损伤的保护和氧化应激的影响，结合其体外清除自由基抗氧化活性和对CCh诱导的L．02肝细胞损伤的保护，从抗氧化的角度探讨了BRA对肝损伤保护作用的主要机制。主要研究结果如下：1BRA的分离纯化及其成分鉴定研究：研究大孔树脂对BRA的吸附纯化，并采用HPLC分析纯化前后BRA花色苷种类和含量。结果表明：AB．8大孔树脂对BRA有较好的分离纯化效果，其最佳工艺参数为，上柱液pH=2，样品浓度1．0mg／ml，吸附流速1．0ml／min，以70％乙醇为解吸剂，洗脱速度1．0ml／min。在该条件下，树脂的重复利用率好，使用5次后吸附率无显著性差异(P>0．05)，使用7次后，吸

3、附率仅降低2．58％。BRA经AB．8大孔树脂纯化后，总抗氧化能力提高3．99倍。通过比照标准品，分析BRA中矢车菊素一3-葡萄糖苷(Cyanidin一3-glucoside，C3G)为36．98％、芍药定．3．葡萄糖苷(Peondidin．3．glucoside。Pn3G)为4．88％、天竺葵色素一3．葡萄糖苷为(Pelargonindin．3．glucoside，P93G)2．76％，分别占总花色苷总含量为82．88％、10．94％和6．18％。2BRA对cch亚急性小鼠肝损伤的的保护和氧化应激的影响：研究了BRA对cch小鼠亚急性肝损伤的保护及抗氧化作用，分析小鼠血清肝酶活性和氧化．

4、抗氧化水平，并通过HE染色观察肝组织病理学变化。结果表明：小鼠摄入BRA后的低(0．409／kgbw)、中(0．809／kgbw)、高(1．609／kgbw)剂量组经cch诱导的亚急性肝损伤小鼠的ALT、AST活性较模型组显著降低(P<0．05)，血清和肝脏中MDA的生成量显著减少(尸<0．05)，SOD、GSH．Px活性明显增强(尸<0．05)，肝脏组织的总抗氧化能力(T-AOC)显著提高(户<0．05)；摄入高剂量BRA，8-OHdG的含量显著降低(P<0．05)；由CCh引起的肝脏组织气球样变、脂肪变性，炎症浸润等病理学黑水化色苷对CCI。历导小鼠盯损fjJ的保护作用及j0抗钒化机制

5、损伤，喂食BRA后，均可得到明显改善。3BRA的体外清除自由基抗氧化活性研究：比较了不同化学体系中经大孔树脂AB．8纯化前黑米花色苷粗提物CBRA(Crudeextractofblackriceanthocyanins，CBRA)和纯化后BRA的抗氧化活性，并分析了BRA中3种主要花色苷单体C3G、Pn3G、P93G的抗氧化能力大小。结果表明：BRA具有一定的还原能力和抗氧化活性，对DPPH·有较好的清除作用，BRA比CBRA显示出更强的上述活性。当浓度为0．0259／L时，BRA总抗氧化值为1．993mmol／g，是CBRA的3．99倍。CBRA清除DPPH·的IC50值为22J．tg／

6、ml，BRA清除DPPH·的IC50值为121zg／ml。3种花色苷单体总抗氧能力表现为C3G>P93G>Pn3G，当浓度为O．1∥L时，C3G的。TAC值为1．299，P93G的TAC值为0．173，Pn3G的TAC值为0．112，三者差异极显著(P<0．01)。3种花色苷单体清除DPPH·能力表现为C3G>P93G>Pn3G，三者清除DPPH·能力IC50分别为2．50I_tg／ml、14．00Irtg／ml和25．40I，tg／ml，差异达极显著水平(P<0．01)。4BRA对人胚胎肝细胞株L．02CCh损伤的保护作用研究：通过建立CCl4对人胚胎肝细胞株L．02的损伤模型，研究了不

7、同剂量BRA及其3个单体C3G、P93G、Pn3G对CCh损伤的L．02肝细胞损伤的保护作用，结果表明：CCh诱导小鼠肝细胞损伤的最适损伤浓度为20mmol／L，损伤时间为6h。经CCh损伤后模型组细胞存活率仅为45．68％，上清液肝酶活性显著升高(尸<0．05)，抗氧化活性呈降低趋势，脂质过氧化产物MDA和NO含量显著增加(尸<0．05)。BRA可一定程度地改善肝细胞L．02损伤，能明显提高肝细胞的存活率，且浓度越高，