dag%2fpkc信号转导途径调控机制初步的研究

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1、独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：虹签字日期：堕年量月量日学位论文版权使用授权书本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、使爰学位论文戆裁定，曩意大连医辩大学绦馨并囊警家有关部f-】或枫构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权

2、大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据疼送行检索，可以采爨影印、缩印或扫接等笺崩手段保存、汇缡学位论文。论文作者签名：指导教师签名：签字基赣：旌年上胃土嚣DAG偿KC信号转导途径调控褫制豹初步研究博士磺究生：李驻蔼指导教师：燕秋教授专业名称：生萼夯化学与分子生物学攘要DAG撵Ke痿号转导遗路奁缨魏内信号调控潮终孛其毒重要终翅，是参与细胞嫩长、增殖、分裂调控的重黉信号邋路之一，并广泛分布于备秘缀缀缨熬。本磷究王终溪察≯￡e’粪糖及p嚣醚T2过表达鼹DAG垮Kc信号转导谂径的调控作用。Le’寡糖对蛰矗G／P嚣c售号转导途较戆谖撩撵媛鹣龌究哺乳动物

3、胚胎着床怒生殖的关键环节，涉及胚胎与予茸之间所发生豹嚣步协调豹一篆列变他。近年来载磷究表明，，l、甄子富内貘上皮缨貔表两的Lewis寡糖在胚胎着床过程中疑有重鞭作用。Lewis寡糖是岩藻糖化弱巍糖系烈赛羲，包括Hl、H2、L08、Le“、Le。、sLel鞠Le’等。其中，Hl、Le。、sLe。和Le7在胚胎着床期呈阶段特异性表达，与胚胎发育及羞床密甥相关。体肉子富腔注射Le7特异携体、体外熬培养模型中加入Le7特异抗体以封闭子宫内膜表短的Le’均可明显抑制胚胎着床，但其馋用枧理和波达调控枫铡爨兹所知甚少。核酸和蛋白质的合成均需模板来决定其核苷酸或氨罄酸的排列顺

4、序，恧糖链的台成却没诲模扳，它是出一系列具有麓度特舞性的糖基转移酶的倦化作用来完成。岩藻糖化寡糖的台成怒由岩藻糖基转移酶(&cosyitranferases，FuTs)催化的。因此，岩藻糖基转移酶的表达可能是这些岩藻糖基化寡糖抗原合成及其表达调控的关键。目前发现11种岩藻糖基转移酶，小鼠主要表达FuTl，2，4，7，8，9共6种功能性岩藻糖基转移酶，其余为假罄因。蔟中FUTl和FUT4参与Le’寡耱的合成，FuT7参与sLe。寡糖的台成，两FuT9是Le。寡糖合成所必需的。本室前期的研究工作溉察了部分FUTs在着床过程中的表达及调控，僵FU聪家簇在小鼠胚胎着床

5、过程中的表达谱变化尚不清楚。为了解参与Le7寡糖合成关键酶FUTl和FuT4，及其它岩藻稽基转移酶家族(FuT2，FuT7，FuT8，FuT9)在胚骀着床过程中的变化及机制，采用R■PcR和western-blot技术攒l定了在妊霰不同天数、延迟着床以及延迟着床激活组小鼠子宫内膜的6种酶的表达谱。结果发现，早孕期阀FU善l，}U彳4窥FU下7静表这奁子塞凌貘呈泠菠整改变。FUTl在擎第1天有较高水平的表达，孕第2天以后表达开始下降，然后升高，孕篱毒天鄂瓤黪开始蓑泰簿表达最强，藿寐嚣降低，僵与孕第l天无唆鼗罄异。FuT4和FuT7在孕第3天表达达到商峰，t孕第4

6、天维持商表达，罄瘩后黪僬。FuT2、FUT8秘FUT9在早譬子富爨貘垮为寒表达，在不同天数间无显著差异。延迟着床雌激索激活组与延迟着脒组的小鼠子宫爽膜辊滋较，激溪缀中FuTl表达辫低；Fu罩?移FuT8懿表达无显著差异：FuT2、FuT4和FUT9的表达则明显增加。结果提示，妊娠期间，小鼠子寒悫膜岩藻糖基转移酶的表达在激素都坯黪瓣调控下呈黔段性交化，但不同的FUT类型受调控作用的程度不相同。为进一步搽讨Le’寡糖懿作用机制，采用共徐连接Le’寡糠驰璩鼹糖小球模拟胚胎与人子宫内膜上皮细胞共孵育，观察了Le’寡糖对予甏内膜细胞DAG／PKe馈号转导途径的影响。结果

7、发现，Le’寡糖霹但遴PLcyl}；i=}胞浆向质膜转位，弗被磷酸化而活化，同时升高细胞内DAO的水平，促进cpKcQ葶雎cPKC§2的活化和膜转位。人_孑窘走膜上皮缁臌表面韵Le7寡糖被抗Le7寡糖特异的单克隆抗体封闭詹，绪聚楣反。提示Le’可能作为胞外僚号分予上调予富内膜细胞DAG／PKc信号转导途径。根据以上实验结果推测人子富内膜细胞(JEC细胞)膜蛋白中存在Le’寡糖静特异暇结合凝自或称之为Le，寡糖受体。Le’寡糖通过与此受体结合启动细胞内特定的信号转导通路以促进胚胎辫床。为寻找此蛋白，分潮采用亲霸层析及亲帮碾辩沉淀技术对jEc缅臆膜蛋白中的Le’寡

8、糖特异性结合蛋白进行分离纯化，并采用s