ngf调节m电流对大鼠tg神经元兴奋性的影响

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1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．5英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．10研究论文NGF调节M电流对大鼠TG神经元兴奋性的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11月Ij吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯儿材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．12结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．24匀

2、了刁≮⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯厶-t附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．30附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．42讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．48综述KCNQ(Kv7)钾通道作为药物靶点的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．50致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一68个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一69中文摘要NGF调节M电流对大鼠TG神经元兴奋性的影响摘要M通道是电压及配体依赖性的慢激活、非失活、慢去活的电压门控性钾通道。KCNQ2～5这四个亚型构成的同源或异源四聚体是构成神经元M通道的分子基础，对维持神经元静息膜电位、调节神经元兴奋性和调节突触传递等神经生理活动有着重要的意义。KCNQ2～5亚型基因分别位于不同的染色体上，除了第五个亚型以外，其他亚型的突变均发现与人类遗传疾病相关，如良性家族性新生儿惊厥(benignfamilialne

4、onatalconvulsions，BFNCs)和癫痫，先天性耳聋等。近年来研究发现，神经元M电流参与了慢性疼痛和炎性疼痛的的信号转导。神经元和外周痛觉感受器M通道的抑制将会导致神经元去极化且兴奋性增高，从而引发疼痛。由多个通路介导的M电流抑制是疼痛产生的机制之一，增强KCNQ／M通道功能(如提高KCNQ／M通道转录水平和开放M通道等)可以明显减轻疼痛。KCNQ开放剂对多种神经病理性疼痛模型及炎性疼痛模型都具有很好的疼痛预防及治疗作用。神经生长因子(Nervegrowthfactor,NGF)是最早被发现的神经营养素家族成员，它对中

5、枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用。这些生物学作用多是一种慢效应，然而近年来越来越多的证据表明，神经生长因子还表现出快速的调节作用，如神经递质的释放，突触的传递，离子通道功能和神经元兴奋性等，以往的研究认为NGF可以调节钠通道和钙通道以及钙激活的钾通道影响神经活动。我们的前期研究发现NGF还可以抑制大鼠颈上交感神经节(superiorcervicalganglion，SCG)和脊髓背根神经节(dosalrootganglion，DRG)神经元记录的M电流，提示M通道可能会成为NGF调节神经兴奋

6、性的新途径。而对于三叉神经节(trigeminalganglion，TG)神经元上是否能记录到M电流及NGF又有怎样地调节它?这对于研究TG神经元电活动相关的神经病理性疼痛——三叉神经痛有重要意义。本课题旨在TG神经元上验证M电流存在的基础上，观察NGF对其调节规律，主查塑墨并在三叉神经痛动物模型上观察NGF受体和M通道表达水平变化，为三叉神经痛治疗提供帮助。目的：从TG经元上记录M电流并进行验证，在原代细胞和表达系统观察NGF对它的调节规律，并制备三叉神经疼痛动物模型，观察NGF受体和M通道表达变化，进而分析NGF通过这一途径参与

7、神经病理性疼痛发挥作用的可能性。方法：(1)质粒cDNA的扩增与提取：KCNQ2、3，TrkA基因克隆在pcDNA3．0质粒，GFP基因克隆在pEGFP．N1质粒，用TOPlo感受态细菌转化、扩增之后用试剂盒提取，并用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计鉴定质粒的纯度与浓度。(2)大鼠三叉神经节神经元分离及M电流的鉴别：急性分离乳鼠TG神经细胞，24小时后采用穿孔全细胞膜片钳记录方式，对去活尾电流进行鉴别，用KCNQ通道特异性开放剂RTG和特异性阻断剂XE991进行观察。利用KCNQ亚型对TEA的敏感度不同，分析TG神经元上所表达的亚型，

8、再用westernblot技术对典型的KCNQ2亚型进行验证。(3)在表达细胞上，通过将KCNQ2、3，TrkA及GFP质粒共转染于HEK293B细胞，记录NGF激活TrkA受体实现对KCNQ2／3电流的调节作用。(4)在原代培养的T