酶法提取茄尼醇及有机体系中酵母转化茄尼醇产coq-%2c10-的研究

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1、摘要粟酒裂殖酵母S．promb2．1794(Schizosaccharomyce．spromb)具有转化底物茄尼醇合成辅酶Q，。的能力。本论文在前面研究的基础上，主要揉讨了茄尼醇的酶法提取及有机体系中S．promb2．1794(Schizosaccharomyce．spromb)转化底物茄尼醇合成辅酶Q10的工艺过程，并对其转化机理进行了初步的分析。研究结果表明：初始口H值4．0，浓度2．5％(v／v)，45"C下利用Viscoz'yl'neL复合酶对熘末进行降解预处理，作用6个小时，茄尼醇提取率与粗品纯度

2、分别达2．172％和32．93％，其指标优于其它预处理方式；经精制以后纯度达92．83％，可用作辅酶Qlo、维生索K2等生物合成的中间体，有较高工业应用价值。鉴于茄尼醇和辅酶Q10的水不溶性，构建了有机转化体系：异丙醇和olt5．0、0．1mol／L的磷酸缓冲液按2：8(v／v)比例组成转化体系，菌体添加量为0．5％(∥v)，底物添加浓度为500mg／L．30℃下220r／m转化8h，辅酶Q-o产量为91．04mg／L发酵液．单位细胞内辅酶Q，o产量为3．726mg／g细胞，相对空白提高了203．“，相对水

3、相体系中辅酶Q-o产量提高了81．24％。预实验的基础上，选用丙二醇作为细胞通透剂，结果发现，适当浓度的有机溶剂通过使细胞膜形成可逆的4qL有效提高细胞膜通透性，但是浓度过高，导致了一定的相毒性，使得细胞活性下降甚至失活，并确定了合适的有机溶剂作用条件。茄尼醇作为糖酶Qm侧链供体，进入细胞以后，诱导了异戊二烯单体的合成，直接磷酸化后加成得到辅酶Q-。侧链；底物茄尼醇的渗入，诱导细胞内某些产物降解酶的合成，被降解成小的单体或是小的片断，进而在异戊烯基转移酶的作用下，加成得§Ⅱ辅酶Qlo的侧链。关键词：粟酒裂殖

4、酵母S．promb2．1794，茄尼醇，辅酶Qto，有机体系AbstractSchizosaccharomyce．spromb2．1794hadacatalysistosolanesolintoCoQlo．hlthispaper'enzymaticextractionofsolanesolfi'omwastetobaccowel-estudied，thecatalysissystemforCoQl0fromsolanesolwereinvestigatedbyyeastcell，effectoforgani

5、csolventonmembranepermeabilityofSchizosaccharomyce．spromb2．1794andthetransformationmechanismwerealsodiscussed．ThestudyclarifiedthatwastetobaccowashydrolyzedbyViscozymeLunderopdmalreactioncondition(pH4．0，enzymeconcentrationof2．5％，45℃，6h)，theextractionratewa

6、s2．172％，andthepurityofsolanesolwas32．93％．ARerrefining，thepurityreached92．83％，couldbeusedasanintermediateforthebiosynthesisofCoQjoandvitaminK2，hadhighpotentialapplication．Thewater／organicbiotraasfommtionsystemWasestablishedasaresultofthewater-nonsohibleofso

7、lanesolandcot)”Isopropanolasanorganic，phosphatebuffer(O．1moUL。pH5．O)asthewaterphase，thevolumeratioofwaterphasetoorganicplmseWas2：8(v／v)，0．5％(w／v)cells，500mg／Lsolanesol，30"C，220rpmfor8h．91．037ⅡI班CoQl0Wasproduced，Therelativeincreasedratioofyieldtocontrolw丑s2

8、03，45％towaterph∞ebiotransformalionWas81，24％．PmpyleneglycolastheorganicsolventOilmembranepermeability·ThemechanismoforganicsolventcouldinducecellmembranepermeabilityWasthattheperforatedeffectresultedfromcellme