抗结核药物作用机制及作用靶点的研究

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1、摘要本研究为抗结核药物的作用靶点及作用机制的研究，分为两个部分。第一部分研究了吡嗪酰胺抗结核杆菌的作用机理，第二部分着重于反义技术抑制结核菌株H37Ra生长的研究。吡嗪酰胺是一种非传统的抗结核杆菌一线药物，它在体内有较高的抗菌活性，但是在体外的抗菌活性不佳。由于PzA能够杀死半休眠状态的结核杆菌，而其它药物则不能，这使得PzA在缩短9．12个月疗程到现有的6个月疗程上发挥着独特的作用。正是由于PzA的这些特性使得对于PzA的作用机理研究成为热点。然而，由于PzA的特殊性质，PzA的作用机理，作用靶点还不

2、清楚。本实验研究了营养饥饿处理过程对于PzA抗结核杆菌作用的影响，我们还研究了脂肪酸、苯甲酸和水杨酸对PZA抗菌活性的影响。结果表明营养饥饿的处理过程破坏了结核杆菌的膜电位，从而有利于PzA的抗菌作用。PzA对经过5天乘lO天的营养饥饿过程的结核杆菌有更强的杀菌效果。脂肪酸、苯甲酸和水杨酸对于正常生长的和营养饥饿后的结核杆菌都有促进PzA抗菌效果的作用，对于营养饥饿后的结核杆菌作用更明显。这些结果为PzA的抗菌作用机理提供了新的视点，为进一步研究PzA的抗菌作用机理和有效开发抗结核新药提供一定的理论基础

3、。反义寡核苷酸作为一种新型的药物，可以用于特异性地抑制基因表达，目前已经用于对多种疾病地治疗研究。肌醇是真核细胞中一种重要的多聚醇，存在于链霉菌属和分枝杆菌属中。肌醇在分枝杆菌中被用于合成分枝硫醇，分枝硫醇在分枝杆菌的氧化应激反应中发挥重要的作用，对细菌的生长和毒力具有重要意义。在本实验中，我们选定编码肌醇．1一磷酸合成酶的in01基因为靶基因，使用RNASTRUCTU也ANAL，YSIS软件对inol基因序列的二级结构进行分析，根据序列的自由能及其自身成环的可能性，最终确定了四个硫代反义寡核苷酸的靶位

4、点。根据确定的序列让基因公司合成修饰后的硫代寡核苷酸。将硫代修饰后的反义寡核苷酸通过作用于编码肌醇。1．磷酸合成酶的inol基因，使结核杆菌中肌醇的合成受到抑制。对结核杆菌进行了体外生长抑制实验，对相关指标进行了检测。结果显示分枝结核杆菌的I—l—P合成酶是反义核酸治疗的一个很有前景的靶位，为反义硫代寡核苷酸成为新型抗结核药物研究提供理论基础。关键词：吡嗪酰胺结核分枝杆菌营养饥饿反义寡核苷酸inolIIABSTRACT：Thisstudycontainstwoparts，thenrstpanemphsi

5、zethemechanismofactionofp”azinamideantituberculous，thesecondpanemphsizesthestudyaboutantisenseoligonucleotidesinhibitethe口。叭hofM．tuberculosisH37Ra．Pyrazin锄ide(PzA)isanunconventional疔ontlinetuberculosisdI．ugcharacterizedbyhigh加WVDsterilizingactivity’butpo

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7、uli撕tyofPZAanditsabilitytoshortenthef“6肿“胁括(TB)chemotllempy．However，themechallismofactionandt11eactIlaltargetofPZAarepoorlyunderstoodbecauseofitsunusualproperties．111thisstudyweex锄inedmeefrectofnu证entstarvedconditionsonPZAactivity抽w舳atacidpH．wealsoex砌ine

8、dmee雠ctoffattyacids，bellzoicacida11dsalicylicacidonPZAactivityTheresultsshowedmatnu撕entstaⅣedconditionsloweredthemembmnepotentialof^砂∞6n甜已rf“珊m6e彤“，珊括aIIdenhancedtheactiVityofPZA，withfiveaIldtendaystarvationconditionsresul