响应面法优化中国被毛孢多糖提取工艺的研究

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1、上海师范犬学硕士学位论文摘要本研究主要目的为优化冬虫夏草的无性型．中国被毛孢多糖的提取工艺，提取因素包括提取时间、提取温度、提取液PH值和料液比4个因素，每个因素包括5个水平，水平范围分别是，提取时间：40min．180min；提取温度：40。C-120。C：提取液PH：3．11：料液比：10—30。实验选择响应面法中的中心组合实验(CCD)作为优化方法，选择design-expert7．0作为优化软件。由于人工培育的菌丝体中含有大量的淀粉成分．在提取多糖之前，设计用洳淀粉酶进行酶解淀粉，经过用DNS法测量还原糖的

2、量，证明还原糖的量在酶解后的6个小时和9个小时后无显著变化，并且与酶解前还原糖含量差异极显著，证明菌丝体中的淀粉已经被完全酶解。经过软件设计，需要进行30个实验及结果来构建出模型，模型的轨迹会确定一个二元多次回归方程，方程可以计算出最佳提取方案，并且预测出在该点能够提取出多糖的质量。计算结果显示，在提取温度为120。C、时间为119．45min、提取液PH值为3、提取液料液比为10时可达最大优化结果，预测在该实验方案下19冬虫夏草菌丝体可提取多糖的质量为69．59mg。经过试验验证后，证明预测值和测量值接近，差距在

3、可接受范围。软件会对所得模型的准确性进行评估，其中R-Squared。AdjR．Squared，AdeqPrecision。PredictedR．squared等评估参数表明，此模型准确性很高，实验和结果拟合的很少。此外，模型可以预测出在水平范围内任意组合的因素和水平所提取的多糖质量：模型能够表达出交互项共同作用时，对实验结果的显著性影响，分析显示温度和PH值对所提取多糖的质量具有显著性影响；温度和料液比对所提取多糖的质量具有极显著性影响，其它交互项均为不显著。多糖往往具有生理活性，实验选用在中心点所提取的多糖进行

4、了脾细胞增殖的实验，以此从一个角度说明脾细胞的生理活性作用，并且比对了在有ConA和无ConA时多糖对脾细胞分别的作用结果。实验结果证明冬虫夏草菌丝体多糖在2Ug，mI的ConA的辅助下，可以在浓度为1001Jg／ml时对脾细胞刺激起到最大的增殖作用。选择中心点条件所提多糖与提取质量最多的条件下获得的多糖进行了理化性质的比上海师范大学硕士学位论文摘要较，其中包括：单糖组成、分子量测量、红外色谱、多糖含量四个部分。中心点所提多糖是由Man，Glcn，Rha。GIcUA，GIc，Gal，xyl几种单糖组成，最佳提取方案

5、是由Man，GalUA。Rha，GIc。Gal几种单糖组成，二者所含主要多糖均为Man、GIc、GaI。在多糖分子量方面，二者有相似的的面积百分比，且有相似的重均分子量。中心点所提多糖占粗多糖13％，最佳提取方案所提多糖占粗多糖37％。在多糖的红外方面，两中提取方法所提多糖由类似的吸收峰，在吸收峰为1570．1670处，说明可能有羰基和碳碳双键存在，在吸收峰为1412处表示有酯基存在。关键词：响应面法；多糖提取；脾细胞增殖；理化性质上海师范大学硕士学位论文AbnractAbstractAcentralcomposi

6、tedesign(CCD)wasappliedtobuildupapolysaccharidesextractionmodelandtosearchalloptimumextractionmodelforOPHiocordycepssinensis(cs)mycelium．Fourfactorsarechosen，containingsolventPH(3-11)，extractiontemperature(400C-1200C)，extractiontime(40rain-180min)andvolumes(10

7、-30)．Allthesefactorswb圈redividedintofivelevels．Experimentresultsshowthatonlyextractiontemperaturehasasignificantinfluenceontheyield．Alltheseprocesscarriedoutbythesoftwareofdesign-expert7．0．TherealealotofstarchexistintheculturedofmyceliumofO．sinensis，SOdesignto

8、removethestarchfrommycefiumshouldbedonebeforetheresearchofO．sinensispolysac圮harides．Applya-amylasetothisproject，measurethecontentofreducingsugarbyDNS．T0provethecontentchangednotsig