七氟烷后处理对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠远期神经学预后及机制

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1、七氟烷后处理对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠远期神经学预后及机制中文摘要目的：本研究旨在构建缺氧缺血性脑损伤新生大鼠模型，探讨七氟烷后处理对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠是否存在远期神经保护效应；在此基础上，结合缺氧缺血性脑损伤的病理生理特点等，进一步探讨该效应是否通过PI3K/Akt信号通路转导，阻断线粒体渗透性转换而实现。方法：通过Rice法建立7日龄（P7）新生Sprague-Dawley(SD)大鼠HIBD模型，随机分为10组（n=12）：假手术组（Sham）：建模时暴露左颈总动脉后只挂线不结扎，未予缺氧及七氟烷处理；对照组(HI/Control)：即缺氧缺血模型组，未予七氟烷处理；七氟烷后处

2、理组(HI+Sev)：将HIBD大鼠放入2.5%七氟烷小室中（30%O2+70%N2）30min处理；侧脑室注射LY294002联合七氟烷后处理组(HI+Sev+LY)；侧脑室注射L-NAME联合七氟烷后处理组(HI+Sev+L-N)；侧脑室注射SB216763联合七氟烷后处理组(HI+Sev+SB)；侧脑室注射苍术苷（atractylosideAtr）组(HI+Atr)；侧脑室注射Atr联合七氟烷后处理组(HI+Sev+Atr)；侧脑室注射环孢霉素A（cyclosporinACsA）组(HI+CsA)；侧脑室注射CsA联合七氟烷后处理组(HI+Sev+CsA)；各组均于模型建立（或假手术

3、）后复氧前5min侧脑室注射相应药物或生理盐水。所有干预于5h内完成，同温空气中待醒后，放回原笼，常温喂养。P15-P29行平衡实验、P21-P27行悬吊实验，P30-P35行新物体识别实验，P37-P42行Morris水迷宫实验，观测各组大鼠感觉运动功能及学习记忆功能；水迷宫实验结束后处死，以4％多聚甲醛灌流取脑，行脑形态组织学测评，取出双侧大脑，观察、称重，分离左侧海马行病理切片（HE染色），观察、计数海马CA1区、CA3区椎体层存活神经元，反映左侧大脑组织的损伤程度；另取SD大鼠120只，随机分为10组（n=12），同法建模干预，24h后处死，迅速分离左脑海马，Western-blo

4、ting法检测海马Akt、p-Akt、eNOS、p-eNOS、GSK-3β、p-GSK-3β表达，分光光度法检测线粒体渗透性转换。5结果：（1）1）悬吊实验：各组大鼠悬吊时间无显著差异（F=0.430，P=0.916）2）平衡实验：与对照组比较，七氟烷后处理、单纯环孢霉素A及环孢霉素A联合七氟烷后处理组实验评分升高（P<0.01），而单纯苍术苷及苍术苷联合七氟烷后处理组实验评分无显著差异（P>0.05）；与七氟烷后处理组比较，侧脑室注射LY294002联合七氟烷后处理组、侧脑室注射L-NAME联合七氟烷后处理组、侧脑室注射SB216763联合七氟烷后处理组以及单纯苍术苷和苍术苷联合七氟烷后

5、处理组实验评分明显下降（P<0.01），而环孢霉素A联合七氟烷后处理组实验评分无显著差异（P>0.05）。3）新物体识别实验：第0h、3h、24h识别系数，与对照组比较，七氟烷后处理、单纯环孢霉素A及环孢霉素A联合七氟烷后处理组增高（P<0.01），而单纯苍术苷及苍术苷联合七氟烷后处理组无显著差异（P>0.05）；与七氟烷后处理组比较，侧脑室注射LY294002联合七氟烷后处理组、侧脑室注射L-NAME联合七氟烷后处理组、侧脑室注射SB216763联合七氟烷后处理组以及单纯苍术苷和苍术苷联合七氟烷后处理组明显下降（P<0.05），而环孢霉素A联合七氟烷后处理组无显著差异（P>0.05）；4

6、）Morris水迷宫实验：①定位航行实验：平均逃逸潜伏期，与对照组比较，七氟烷后处理、单纯环孢霉素A及环孢霉素A联合七氟烷后处理组明显缩短（P<0.05），而单纯苍术苷及苍术苷联合七氟烷后处理组则无显著差异（P>0.05）；与七氟烷后处理组比较，侧脑室注射LY294002联合七氟烷后处理组、侧脑室注射L-NAME联合七氟烷后处理组、侧脑室注射SB216763联合七氟烷后处理组以及单纯苍术苷和苍术苷联合七氟烷后处理组明显延长（P<0.05），而环孢霉素A联合七氟烷后处理组实验评分无显著差异（P>0.05）；游泳轨迹，七氟烷后处理、单纯环孢霉素A及环孢霉素A联合七氟烷后处理组以直线式或趋向式为

7、主，三者无显著差异（P>0.05）；而对照组、侧脑室注射LY294002联合七氟烷后处理组、侧脑室注射L-NAME联合七氟烷后处理组、侧脑室注射SB216763联合七氟烷后处理组、单纯苍术苷及苍术苷联合七氟烷后处理组以边缘式或随机式为主。②空间探索实验：大鼠在原平台象限的探索时间、探索路6程及穿台次数，与对照组比较，七氟烷后处理、单纯环孢霉素A及环孢霉素A联合七氟烷后处理组明显延长（P<0.01），而单纯苍术苷及苍术苷联