GBT28070-2011-黑麦草腥黑粉菌检疫鉴定方法.pdf

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1、ICS65．020．01B16园国中华人民共和国国家标准GB／T28070--2011黑麦草腥黑粉茵检疫鉴定方法DetectionandidentificationofTilletiawalkeriCastlebury&Carris2011—12—30发布2012-06-01实施宰瞀鹊紫瓣警糌瞥翼发布中国国家标准化管理委员会促111标准分享网www.bzfxw.com免费下载刖罱GB／T28070--201本标准按照GB／T1，1—2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC／TC271>提出并归口。本标准起草单位：中华人民

2、共和国深圳出入境检验检疫局，深圳市检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：章桂明、程颖慧、王颖、陆清、凌杏元、龙海、陈枝楠、刘新娇、仲建忠、杨伟东、缪建锟。标准分享网www.bzfxw.com免费下载1范围黑麦草腥黑粉菌检疫鉴定方法GB／T28070--2011本标准规定了黑麦草腥黑粉菌的检疫鉴定方法和检疫鉴定流程，明确了取样和样品保存方法。本标准适用于黑麦草传带黑麦草腥黑粉菌的检测以及小麦中污染的黑麦草腥黑粉菌的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最

3、新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB／T6682分析实验室用水规格和试验方法GB／T18085植物检疫小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法GB／T19495．2转基因产品检测实验室技术要求SN／T2122进出境植物及植物产品检疫抽样3黑麦草腥黑粉菌基本信息中文名：黑麦草腥黑粉菌。学名：T／lletiawalkeriCastlebury&Carris(简称Tw)。英文名：ryegrassbunt。属真菌界Fungi、担子菌门Basidiomycota、黑粉菌纲Ustomycetes、黑粉菌目Ustilaginales、腥黑粉菌科Tilletiaee

4、ae、腥黑粉菌属Tilletia。病粒及附着于健康种子表面的冬孢子是病原菌进行远距离传播的主要途径，由于该病局部侵染的特性，在收获期间很难有效的清除混杂于健康种子中的病粒，因而病粒可随同小麦或黑麦草的资源性引种或科研性引种而进行远距离传播。黑麦草腥黑粉菌的其他信息参见附录A。4方法原理根据黑麦草腥黑粉菌的生物学和形态学特征以及分子生物学特征，应用相关仪器，包括显微镜和PCR仪等对小麦印度腥黑穗病菌进行鉴定。5检疫鉴定流程检疫鉴定流程见图1。标准分享网www.bzfxw.com免费下载GB／T28070--20116取样方法2图1黑麦草腥黑粉病菌检疫

5、鉴定流程图散装船运黑麦草种子及小麦参照GB／T18085取样方法进行取样。袋装黑麦草及小麦参照SN／T2122取样方法进行取样。标准分享网www.bzfxw.com免费下载7主要仪器设备和试剂7．1主要仪器设备1摇床。2显微镜。3纯水器。4测序仪。5电泳仪。6低温冰箱。7显微操作仪。8超净工作台。9高压灭菌锅。10光照培养箱。11旋涡振荡器。12普通离心机。13冷冻干燥机。14凝胶成像仪。15核酸蛋白分析仪。16PCR仪(常规PCR仪、实时荧光PCR仪)。17破壁针(具有平截切面的针，能将孢子压碎)。18培养皿(9cm)。19筛网(40／zm、20

6、pm)。20孔径100pm的毛细管。21锥形瓶(250mL、500mL)。22盖玻片(18mm×18mm)。23PCR反应管(0．2mL，0．5mL)。24载玻片(25mmX76mm)，厚(o．8mm～1．0mm)。25Tip头(0．1／tL～10弘L，5pL～200pL，100pL～1000／zL)。26可调微量移液器(2pL，10pL，20弘L，100pL，200pL，1000pL)7．2主要试剂除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。7．2．1三氯甲烷。7．2．2异戊醇。7．2．3异丙醇。7．2．4醋酸钠。7．2．5甲酰胺。7．2．670

7、％乙醇。7．2．7无水乙醇。7．2．8Tris饱和酚。7．2．9Taq酶。GB／T28070--20137标准分享网www.bzfxw.com免费下载(；B／T28070--2017．2．107．2．117．2．127．2．137．2．147．2．157．2．167．2．177．2．187．2．197．2．207．2．21Gelatin。溴化乙锭。DNAMarker。PDA培养基。SDS提取液。PeR缓冲液。电泳缓冲液。上样缓冲液。Bigdye试剂盒。TaqManUniversalPCRMasterMix。席尔氏浮载剂，见GB／T18085。dNT

8、Ps(dATP、dGTP、dCTP、dTTP)。8检测与鉴定8．1实验室器皿和晒网前处理将所有实验器皿和筛网浸泡于1．69