不同冲洗液残余药对粪肠球菌生物膜的影响

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1、硕士学位论文染料进入牙本质小管中，随机抽取5个预备好的牙本质块样本，加入结晶紫溶液后，按以下离心速度顺次离心1400g，2000g，3600g，和5600g，每次离心5min共离心两次，在每次离心中均去除渗出的结晶紫溶液，并加入新鲜结晶紫溶液。在另外5个牙本质块样本中加入结晶紫溶液静置24h。观察离心法是否能使染色液透过牙本质块。确定定速离心的方法有效后，随机抽取2个预备好的样本，加入粪肠球菌悬液，按上述离心法离心，吖啶橙染色液染色后倒置荧光显微镜观察。确定模型建立成功后将剩下的20个样本随机分成两组：A组加入粪肠球菌菌液后，按上述方法顺次定速离心；

2、B组为空白对照组加入BHI液体培养基后顺次定速离心；两组分别随机抽取一半样本置于扫描电镜下观察，另一半样本经LIVE／DEADBacLight荧光染色后，激光共聚焦扫描显微镜观察。3．冲洗液残余药量对本质小管内粪肠球菌生长的影响选择因正畸拔除的健康前磨牙6颗，按上述方法制备牙本质块样本。共制备12例4mmx4mmx2mln大小半圆柱状牙本质块样本，加入粪肠球菌菌液，按上述离心方法离心。将预备好的样本随机分成四组：5．25％次氯酸钠溶液0d组、5．25％次氯酸钠溶液7d组；2％氯己定溶液0d组，2％氯己定溶液7d组。样本分别经5．25％次氯酸钠溶液，与

3、2％氯己定溶液处理。抽取0d组样本，经LIVE／DEADBacLight荧光染色后激光共聚焦扫描显微镜观察，每个样本随机抽取2个区域观察。剩下的7d组样本置于厌氧菌培养箱中，培养7d后取出，LIVE／DEAD染色后，激光共聚焦扫描显微镜观察样本牙本质内细菌清除情况。Imaris7．2．3软件获取三维重建图片，Bioimage．L软件统计三维重组图像活菌体积计算每组样本活菌比例，SPSS13．0处理数据。结果1．24h内细菌生长曲线图显示，16h进入了稳定期。各组冲洗液对粪肠球菌生物膜均有不同程度的抑制作用。2％氯己定溶液组活菌数最少，能抑制99．9％

4、细菌生物膜形成，次氯酸钠溶液组活菌数多，抑制细菌生物膜形成能力最差III摘要分别抑制13．3％、18．8％细菌生物膜形成，17％乙二胺四乙酸溶液与10％柠檬酸溶液抑制细菌生物膜形成能力次于2％氯己定溶液组，分别能抑制43．8％与45．3％细菌生物膜形成。2．成功建立粪肠球菌感染模型。定速离心组，见结晶紫染料从牙本质髓腔面渗透到牙骨质面，浸泡组牙本质表层髓腔面呈深紫色，深层牙本质组织清洁未见任何紫色染料存在。表明，离心方可以使结晶紫染色液透过牙本质，同样菌液也可以透过牙本质。荧光显微镜结果与激光共聚焦扫描显微镜观察结果，均显示，牙本质样本中有大量长短不

5、一的绿色荧光。激光共聚焦扫描显微镜下，大部分牙本质小管被细菌浸润，属于重度感染模型。空白对照组未见有细菌浸润，仅见少量零散浅绿色荧光。扫描电镜观察结果显示：牙本质块髓腔面，可见大量粪肠球菌成团块状聚集于牙本质小管口，并浸润到牙本质小管内，牙本质小管内见大量细菌浸润，大部分细菌形态规则，阴性对照组未见细菌浸润，牙本质小管通畅，结构清晰，胶原纤维交织成网并嵌入管壁。3．结果显示，5．25％次氯酸钠溶液7d组活菌体积较5．25％次氯酸钠溶液0d组多，其差异具有统计学意义俨<0．05)，2％氯己定溶液0d组活菌体积与2％氯己定溶液7d组相比无明显差异(尸>O

6、．05)，表明，2％氯己定残余药液在7d内对牙本质小管内粪肠球菌具有一定程度的抑制作用；5．25％次氯酸钠残余药液在7d内对牙本质小管内粪肠球菌未显示出抑制作用。结论五种根管冲洗液24h内，均不同程度抑制牙本质表面粪肠球菌细菌生物膜形成，其中2％氯己定溶液能力最强，次氯酸钠最弱。离心方法建立的牙本质块粪肠球菌感染模型，细菌能浸润牙本质小管并侵入牙本质小管深部。2％氯己定溶液7d内可持续抑制牙本质小管内粪肠球菌生长。关键词：生物膜牙本质粪肠球菌感染模型IV硕士学位论文EffectsofAntimicrq一ABSTRACT●‘，i。，●．iltllat●

7、witllABSTRACTobjectivesTostudytheeffectsofantimicrobialactivityofdifferentirrigatingagentsresidualindentinesurfaceonE．faecalisbiofilmin24h，observedbyconfocallaserscanningmicroscopy．AnewnoninvasiveE．faecalisinfecteddentinaltubulesmodelwasestablishedbycentrifugationmethodstostudy

8、theeffectivenessofdentindisinfectionin0dand7dbyusingco