氨基酸序列测定

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1、氨基酸序列*测定综述【作者】【联系方式】【摘要】氨基酸序列测定是一个较老的话题,早在20世纪30年代Pauling和Coreyx-射线衍射方法研究氨基酸和肽。可是近几年关于氨基酸序列的测定并不多，测定氨基酸序列要花很长时间，到了较快捷分析ＤＮＡ的方法试用成功后，直接分析蛋白质的遗传密码比分析蛋白质本身更普遍。但该文仍然将对氨基酸序列测定相关研究进展作一综述。【引文】氨基酸是构成蛋白质的基本单位，赋予蛋白质特定的分子结构形态，使它的分子具有生化活性。蛋白质是生物体内重要的活性分子，包括催化新陈代谢的酶。两个或两个以上的氨基酸化学聚合成肽，一个蛋白质的原始片段

2、，是蛋白质生成的前体。氨基酸广义上是指既含有一个碱性氨基又含有一个酸性羧基的有机化合物，正如它的名字所说的那样。但一般的氨基酸，则是指构成蛋白质的结构单位。在生物界中，构成天然蛋白质的氨基酸具有其特定的结构特点，即其氨基直接连接在α-碳原子上，这种氨基酸被称为α-氨基酸。在自然界中共有300多种氨基酸，其中α-氨基酸21种。α-氨基酸是肽和蛋白质的构件分子，也是构成生命大厦的基本砖石之一。本文对相关研究进展作一综述。【关键词】氨基酸,序列;氨基酸序列测定【正文】1.历史背景我们的头发,指甲……以及对生命活动有催化作用的酶的成分都有蛋白质[1]。蛋白质称为“

3、生命活动的载体”，可见其对生命的重要性。于是科学家对其进行研究，希望找到它的本质，从而对它展开对人类有益的利用。2.前人的工作及成果2.1x-射线衍射方法20世纪30年代Pauling和Coreyx-射线衍射方法研究氨基酸和肽1963年Kendrew及同事利用x-射线分析技术分析了肌红蛋白结构2.2高效液相层析法分析任勇等人应用高效液相层析法和微晶纤维素薄层指纹图谱法分析分析一例稀有β-链变异体:HbDOuledRabah[β19(B1)Asn→Lys]在我国人群中首次发现一例稀有β-链变异体:HbDOuledRabah[β19(B1)Asn→Lys]。先

4、证者女,14岁,壮族,广西靖西县人。先证者母亲及其三个兄妹均为携带者,无明显临床症状。[2]2.3二维核磁共振谱测定谭宁华等人在植物新环肽[太子参环肽A(HA)和B(HB)]的结构研究中,应用COL谱较成功地解决了氨基酸序列[3]2.4SDS-PAGE及蛋白质电泳印迹技术周圆等人在直组人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8的纯化与鉴定确证该目标蛋白得到高效表达和正确加工。随后采用Bio-GelP30凝胶过滤层析和Mono-S阳离子交换层析对重组人NAP-1/IL-8进行了分离纯化,纯化产品达到SDS-PAGE纯。利用琼脂糖平板法测定了纯化产品的嗜中性白

5、细胞趋化活性,推算其比活为2.8×10~5U/mg蛋白。又利用SDS-PAGE测出重组NAP-1/IL-8的分子量约为8.5kD,但根据凝胶过滤层析的洗脱时间推定,在溶液中确实存在分子量稍大于14.4kD的NAP-1/IL-8二聚体。[4]2.5蛋白质自动测序仪用高效液相色谱技术(HPLC)自华支睾吸虫粗抗原(ClonorchissinensisAdultwormantigens,CAA)中提纯15/16ku蛋白,用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定其抗原活性,并使用蛋白质自动测序仪测定其N端部分氨基酸顺序。结果　3个具有抗原活性的纯化样品(H3、H11及

6、H13)中,H13的诊断效果接近CAA,敏感性达90%,特异性95%。分别测获3个纯样的N端15、14和20个氨基酸残基(aa),其中H11的N端14个aa与H13的前14个完全相同。　结论　进一步证明了Cs15/16为有效的诊断抗原,测获的部分氨基酸顺序可为更深入的研究提供参考。[5]1.2SDS-PAGE和IEF测定用制备型聚丙烯酰胺凝胶电泳和制备型等电聚焦纯化了曾报道的光敏核不育水稻(Oryzasativa)农垦58S叶绿体的特异性蛋白质P2,得到SDS-PAGE和等电聚焦(IEF)纯的P2。经SDS-PAGE和IEF测定,该纯蛋白质的分子量是61k

7、D,等电点是5.8。现称P2为P61。氨基酸序列分析表明P61的N-端氨基酸序列与水稻和大麦叶绿体ATPaseβ亚基的N-端氨基酸序列同源。[6]1.3特异性的蛋白酶ｅｎｄｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅＬｙｓ－Ｃ和溴化氰对该酶蛋白进行了裂解作者对已报道的稻瘟菌诱导稻叶脂氧合酶ＣＭ－ＬＯＸ１和ＣＭ－ＬＯＸ２的纯化方法作了进一步改进和完善。改进后的纯化方法可缩短该脂氧合酶的纯化时间，并提高纯化倍数。利用改进的方法，作者从２０ｇ非亲和性稻瘟菌小种接种稻叶中获得了电泳纯的酶蛋白ＣＭ－ＬＯＸ１１３３μｇ和ＣＭ－ＬＯＸ２２０８μｇ。在此基础上，采用特异性的蛋白酶ｅｎｄｏｐｒｏ

8、ｔｅｉｎａｓｅＬｙｓ－Ｃ和溴化氰对该酶蛋白进行了裂解，回收其肽段，