马铃薯a病毒液相芯片快速检测方法的建立

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1、中国农学通报2013,29(15):37-41ChineseAgriculturalScienceBulletin马铃薯A病毒液相芯片快速检测方法的建立121221刘洪义，张永江，刘忠梅，辛言言，李桂芬，张洪祥（1黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心，哈尔滨150001；2中国检验检疫科学研究院，北京100029）摘要：旨在建立可检测马铃薯A病毒(PotatovirusA，PVA)的液相芯片快速检测技术，用PrimerPremier5.0软件对GenBank中PVA核苷酸序列进行分析，设计其特异性探针并用生物素标记。探针偶联荧光编码微球后与PVA的PCR产物杂交反应，用液相芯片

2、检测仪检测荧光信号。结果显示该法具有较好的特异性，不与侵染马铃薯的番茄黑环病毒(Tomatoblackringvirus，TBRV)、马铃薯纺锤块茎类病毒(Potatospindletuberviroid，PSTVd)、马铃薯Y病毒(PotatovirusY，PVY)及番茄斑萎病毒(Tomatospottedwiltvirus，TSWV)反应；检测灵敏度约为10pg/μL总RNA。该方法可用于PVA的快速检测。关键词：马铃薯A病毒；液相芯片；病毒检测中图分类号：S412文献标志码：A论文编号：2012-2980PreliminaryDevelopmentofLiquichipDe

3、tectionTechniqueforRapidDetectionofPotatoVirusA121221LiuHongyi,ZhangYongjiang,LiuZhongmei,XinYanyan,LiGuifen,ZhangHongxiang(1TechnicalCenterofInspectionandQuarantine,HeilongjiangEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau,Harbin150001;2ChineseAcademyofInspectionandQuarantine,Beijing100029)Abstrac

4、t:TodevelopliquichipmethodfordetectingPotatovirusA(PVA),thenucleotidesequenceofPVAwasanalyzedbyusingthesoftwarePrimerPremier5.0,andspecificprobelabeledwithbiotinwaspreparedandcoupledwithfluorescence-codedmicrospheres,whichwasusedforhybridizationreactiontoRT-PCRproductsofPVA.Liquichipdetection

5、methodforPVAwasestablishedbyusingBio-RadLiquichiptodetectfluorescencesignalinthereactionsystem.Thespecificityofthismethodwasevaluatedbyapplyingtheproposedmethodtodetectfourvirusesinfectingpotato,TBRV,Potatospindletuberviroid(PSTVd),PotatovirusA(PVA)andTomatospottedwiltvirus(TSWV).Theresultsde

6、monstratedbetterspecificitytoPVAandnoreactionwithotherthreeviruses.Thesensitivityofthemethodwas1pg/μLoftotalRNA,whichwasequaltotheconventionalRT-PCRgelelectrophoresismethod.ThesuccessfuldetectionofPVAinpotatosamplesuggestedthefeasibilityofthisprocedureforroutinetesting.Keywords:PotatovirusA;L

7、iquichipdetectiontechnique;virusdetection0引言种薯进行严格检疫，该病毒传播扩散的可能性就非常马铃薯A病毒(PotatovirusA)是马铃薯Y病毒属大，具有较高的流行风险。因此该病毒具有非常高的[1-2](Potyvirus)的成员，侵染马铃薯后可造成40%以上的损检疫重要性，已被列入新修订的《中华人民共和国进失，和马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒混合侵染后，造成境植物检疫性有害生物名录》中。该病毒分布于日本、的损失更加严重，是马铃薯生产上危害