egcg对幼龄兔卵母细胞ivm的影响及bmp-15、fshr基因在卵母细胞ivm中的表达

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1、学位论文EGCG对幼龄免卵母细胞IVM能J影响及BMP．15、FSHR基因在卵母细胞IVM中的表达EffectofEGCGontheIVMandtheexpressionofBMP．．15andFSHRgenesinrabbits’oocytematuration研究生：李太坤专业：动物遗传育种与繁殖导师：李拥军教授扬州大学2012年5月李太坤：EGCG对幼龄兔卵母细胞IVM的影响及BMP一15、FSHR基因在卵母细胞IVM中的表达!EGCG对幼龄兔卵母细胞IVM的影响及BMP-15、FSHR基因等霉黧呻的表达㈣删研究生：李太坤YZZ§b，孕!导师：李拥军教授(扬州

2、大学动物科学与技术学院，江苏扬州，225009)中文摘要卵母细胞或胚胎在体外培养时得不到母体抗氧化剂的保护，产生的氧自由基会对卵母细胞的成熟及胚胎的发育产生抑制作用，这是制约卵母细胞体外培养效果的因素之一。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是天然的抗氧化剂，且无毒副作用，是体外培养体系的一种理想的抗氧化添加成分。本实验以新西兰白兔为动物模型，对其进行超数排卵处理后，采集COCs进行体外成熟培养。在TCM．199基础培养体系中通过添加不同浓度的EGCG(0pM、10州、15rtM、20rtM和251．tM)来研究其对新西兰兔卵母细胞体外成熟的影响，旨在改善兔的体外成

3、熟培养体系，提高兔卵母细胞体外培养的效果。同时，采用实时荧光定量PCR技术，检测了幼龄兔卵母细胞成熟过程中BMP．15基因、FSHR基因的相对表达丰度，探讨了BMP．15基因、FSHR基因对卵母细胞体外成熟的影响，为进一步研究兔BMP．15基因、FSHR基因在生殖系统中所发挥的作用及其生殖生物学功能提供理论依据。本研究结果如下：1．在TCM．199基础培养体系中添加不同浓度的EGCG(0rtM、10m'Vl、15rtM、201．tM和251xM)，结果显示，随着EGCG添加浓度的升高，卵母细胞成熟率不断提高，当添加浓度为15m'vt和20pM时，其对卵母细胞的成熟有

4、明显的促进作用，差异显著(P<0．05)；但当EGCG添加过量时，卵母细胞的成熟率显著降低。对于幼龄兔，添加15rtM和20pM相比，效果差异不显著(P>0．05)；但是，对于成年兔，添加209M要明显优于15l-tM，差异显著fP0．05)；当添加15rtM、25州EGCG时，幼龄兔卵母细胞体外成熟率却高于成年兔，但差异也不显著(胗O．05)。3．通过实时荧光定量PCR检测发现，BMP．15基因、FSHR基因在幼龄兔卵母细胞成熟发育的不同阶段中有不同的表达量。对于BMP．15基因，在未成熟

5、卵母细胞中表达水平较低，随着培养时间的推移，其表达量逐渐升高，在培养12h时出现表达量的峰值，并且——一扬州大学硕士论文¨———————————————————————————————————二——二=二二—一一一¨此后一直维持较高的表达量，直至24h，随后下降。这与COCs成熟过程中卵丘细胞的扩散相一致，推测BMP一15基因对于卵丘细胞的扩散有重要作用。对于FSHR基因，在未成熟卵母细胞中有较高表达，oh、6h、有较高的表达量，随后逐渐下降；这可能与卵泡发育初期需要更多的FSH刺激有关，表明FSHR基因对于卵泡发育及卵母细胞的成熟具有重要作用。4．在幼龄兔卵母细胞

6、成熟发育的全过程中，BMP．15基因、FSHR基因的相对表达量呈逆向的动态变化趋势，BMP．15能够抑制FSHR的表达，对FSHR具有负向调控作用。关键词：EGCG；体外成熟；BMP．15基因；FSHR基因；实时荧光定量塾坠竖堕燮塑型绁巡星堕堡垒塑：!!：!婴茎垦垄塾堡塑堕!型主丝壅垄一IIIEffectofEGCGontheIⅥⅥandtheexpressionofBMP。15+andFSHRgenesinrabbits’oocytematurationM．S．candidate：LiTaikunSupervisor：Prof．"LiYongjun(College

7、ofAnimalScienceandTechnology,Yangzllou，Jiangsu,225009)ABSTRACTOocyteandembryocouldnotbenefitfromthematernalantioxidantprotectionwhendivorcedfromthedonorbody，ROScouldrestrainoocytematurationandemryodevelopment．Thisisarestrictfactorofinvitroculture．Epi—gallocatechin·3-gallate(EGCG)isan