mcf-7荷瘤小鼠不同树突状细胞亚群凋亡的研究

《mcf-7荷瘤小鼠不同树突状细胞亚群凋亡的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、南方医科大学2009级博士学位论文MCF．7荷瘤小鼠不同树突状细胞亚群凋亡的研究ApoptosisofDendriticCellSubsetsinMCF--7Tumor—bearingMice课题来源：自选专业名称学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员肿瘤学张还珠罗荣城教授陈尊器教授陈运贤教授周杰教授张为民教授郭亚兵教授刘魁凤教授袁亚维教授论文评阅人陈运贤教授周杰教授郭亚兵教授2012年5月3日广州博士学位论文MCF．7荷瘤小鼠不同树突状细胞亚群凋亡的研究博士研究生：张还珠指导教师：罗荣城摘要第一章MCF．7荷瘤小鼠的建立、树突状细胞的诱导分化及其表面分子标记的检测研究背景和目的乳腺

2、癌是妇女最常见的恶性肿瘤，发病率无论在发达国家或发展中国家仍在逐年上升；随着手术、化放疗、内分泌治疗及靶向治疗等综合治疗的合理使用，乳腺癌的死亡率在发达国家已呈下降趋势，治疗效果亦进入了一个相对平台期。然而，晚期和转移性乳腺癌仍不可治愈，成为威胁女性尤其是发展中国家女性生命的重要原因：另一方面，随着医学科学发展，抗肿瘤免疫治疗作为乳腺癌治疗一个很有前景的治疗模式受到越来越多的关注，树突状细胞(dendriticcells，DCs)作为机体功能最强的抗原呈递细胞，能摄取、加工和递呈抗原从而使T细胞致敏、激活和扩增，有潜在的克服肿瘤耐受的能力和负载肿瘤抗原后诱导产生抗肿瘤免疫力的能力，在抗肿瘤免

3、疫治疗中发挥着重要作用。多项实验证明人类和鼠的DCs主要有两种亚群：髓系来源的树突状细胞(myeloiddendriticcell，mDC)和淋巴来源的树突状细胞(plasmacytoiddendriticcell，pDC)，前者高表达CDllc，低表达CDl23；后者高表达CDl23，低表达CDllc，不同的DCs亚群在介导机体免疫反应中发挥不同的作用。本研究拟通过构建MCF．7荷瘤小鼠，研究其骨髓起源的树突状细胞分化、成熟的情况及是否存在不同亚群表达，为设计新摘要的免疫治疗方法和新的疫苗的提供基础信息。方法1．取对数生长期MCF．7细胞调整细胞浓度为1x107／ml，用于以下实验。2．2

4、0只5周龄无特定病原体(SPF)级BALB／C雌性裸鼠，随机分为2组，用lml注射器向荷瘤组小鼠右侧胸壁第二对乳腺脂肪垫注入0．2mL上述MCF．7细胞悬液，对照组注入0．2mL无血清培养基。待肿块直径达5mm后处死小鼠。3．取小鼠骨髓单个核细胞，RPMll640(10％FBS)培养基调整细胞浓度为107／1．5ml，每llll(60mm))hn入1．5ml细胞悬液，再加入1．5mlRPMll640隔3天更换1次培养液。第3天吸弃全部培养基及悬浮细胞，加入含100ng／mlrmGM-CSF,100ng／mlrmlL-4的上述培养基共孵育，第7天更换培养基时补加脂多糖100ng／mL共孵育，第

5、8天吹打疏松贴壁的增殖性细胞聚集体，次日收集悬浮的细胞即为富集的DCs。相差显微镜下观察细胞形态特点。收集细胞做以下实验。4．用PBS(含I％FBS)调整细胞浓度为106／100d，每流式管加入100ul细胞悬液，再加入lug／管相应荧光素偶联一抗，上机检测。5．荷瘤小鼠乳房肿块病理免疫组化检测：supervision二步法检测ER、PR、Cerb．B2、Ki．67。6．统计学方法：计量资料统计描述用均数4-标准差表示，两组均数比较用独立样本t检验。检验水准u=0．05。结果1．对数生长期MCF．7细胞倒置显微镜下观察，贴壁生长，形态良好、折光性强。2．荷瘤组小鼠在注射MCF．7后第16天乳

6、腺肿块达5mm或以上。荷瘤组和对照组小鼠体重在荷瘤前及荷瘤后均无统计学差异，具可比性。3．从骨髓中获取的PBMC培养至第九天，可见单个的细胞表面有明显毛刺状突起的悬浮的DCs。4．荷瘤组和对照组DCs均高表达CD86、CD83及MHC．II，且荷瘤组CD83表达为U博士学位论文74．61土1．26％，比对照组(77．304．1．41)低，P<0．05。CD34表达荷瘤组表达为1．304．0．17％，对照组为1．714-0．18％，P<0．05。荷瘤组CDl1c+CDl23．细胞52．01d：1．43％，较对照组(56．364-1．76％)低，P<0．05。荷瘤组CDllc．CDl23+细胞3

7、2．194．1．71％，较对照组(28．954-1．39％)高，P<0．05。5．荷瘤小鼠乳腺肿块病理活检可见乳腺癌细胞，免疫组化示：ER(}卜+)，PR(++)，Cerb·B2(-)，Ki-67(H斗)结论1．动物模型构建成功，动物骨髓单个核细胞体外能诱导分化出高质量和高纯度的成熟的DCs。2．MCF．7荷瘤小鼠骨髓起源的DCs存在成熟障碍，肿瘤抗原递呈能力降低，导致T细胞激活、增殖能力下降，机体免疫杀伤肿