甲型流感病毒感染小鼠神经元及胶质细胞的免疫生物学效应

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1、硕士学位论文甲型流感病毒感染小鼠神经元及胶质细胞的免疫生题目物学效应ImmunologicEffectsofNeuronsandGlia英文题目InfectedbyInfluenzaAViruses姓名蒋治武学号10920025所在学院汕头大学医学院导师姓名李康生王革非专业免疫学入学日期2009.09答辩日期2012.06学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作

2、者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日汕头大学医学院硕士学位论文中文摘要研究目的和意义流感病毒为分节段，有包膜负链RNA病毒，主要感染呼吸道上皮细胞，从而引起流感症状。与典型的嗜神经性病毒相比，流感病毒有时在流感相关脑病病人与流感病毒

3、感染动物模型的大脑组织中被检测到。神经元为终末分化细胞，是中枢神经系统的基本结构与功能单位。病毒感染中枢神经系统可导致神经元的损伤与死亡可造成永久的神经后遗症。然而流感病毒是否导致中枢神经系统的病理损伤仍存在争议。因此，进一步明确流感病毒感染神经元细胞后的病理损伤及免疫应答，探索流感病毒感染神经元的生物学特性影响,将有助于理解CNS感染流感病毒后的发病机制,为预防及治疗提供实验依据。病毒感染的胶质细胞后过度释放的促炎症细胞因子,可能是导致神经元的炎性损伤主要原因之一，同时星形胶质细胞也是分泌神经营养因子的重要来源细胞，对神经元起到支持和营养作用。到目前为止，流感病毒感染星形胶质细胞是否上

4、调神经保护因子尚未见文章报道。因此，探索星形胶质细胞在流感病毒感染后,其神经营养因子类型的变化，将有助于明确胶质细胞在流感病毒感染CNS时的功能和作用。实验方法孕鼠18d取胚胎，体外培养小鼠大脑皮层神经元细胞。用流感病毒H1N1体外感染神经元细胞，检测神经元细胞病变效应、细胞凋亡、细胞活性，细胞因子基因转录及蛋白水平变化，检测流感病毒在神经元的病毒基因的转录与复制。新生24h内小鼠，取大脑皮层培养神经胶质细胞，经温和胰酶消化结合定轨摇床振荡的方法分离纯化星形胶质细胞。流感病毒体外感染星形胶质细胞，检测病毒感染后星形胶质神经营养因子转录水平的变化。实验结果及结论1成功分离培养皮层神经元细胞

5、，体外培养神经元纯度经检测在95%以上。2流感病毒感染神经元细胞后，神经元不发生细胞病变效应及凋亡。3流感病毒感染神经元细胞后可显著降低细胞的活性，ST169感染细胞后6-24h内细I汕头大学医学院硕士学位论文胞活性变化不大，PR8株感染6h到24h后，神经元的活性慢慢恢复。4流感病毒感染神经元细胞后，病毒基因的转录在感染6h与24h内表达上调;，病毒vRNA的复制受到影响，在感染后6-24h内几乎没发生变化。5流感病毒感染神经元可诱导神经元的细胞因子（IL-6,IL-10，IFN-β,TGF-β,TNF-alpha，CXCL10)的mRNA水平上调。6病毒感染神经元上清中的细胞因子（I

6、L-6和TNF-alpha）分泌量极低。7流感病毒感染神经元后，神经元细胞中NF-kB蛋白未见被激活。8星形胶质细胞被流感病毒感染后明显上调GDNF转录水平表达，营养因子NGF、BDNF、NT-3转录水平未见改变。关键词：神经元；星形胶质细胞；流感病毒；细胞因子；天然免疫反应II汕头大学医学院硕士学位论文AbstractBackgroundandaimsInfluenzavirusisanenvelopedmultiple-segmentnegative-strandedRNAviruswhichmainlyinfectrespiratorytract.Unlikestereotypic

7、neurotropicviruses,influenzaAvirusessometimescanbedetectedinbraintissuesofpatientsandanimalmodels.Neuronispostmitoticandnonrenewablecellwhichisstructuralandfunctionalunitofcentralnervoussystem.Neurotropicinfluenzavirus