硼替佐米与阿糖胞苷联用对jurkat细胞株增殖和凋亡的影响

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1、河北医科大学硕士学位论文硼替佐米与阿糖胞苷联用对Jurkat细胞株增殖和凋亡的影响姓名：张永晓申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：罗建民201203中文摘要硼替佐米与阿糖胞苷联用对Jurkat细胞株增殖和凋亡的影响摘要目的：非霍奇金淋巴瘤m)是淋巴组织常见的肿瘤之一，有B细胞和T细胞淋巴瘤之分。与B细胞淋巴瘤相比，T细胞淋巴瘤的侵袭性更强，预后更差，生存期更短，严重威胁着人类的生命和健康。现今对于T细胞淋巴瘤的治疗多为常规化疗且还没有标准的一线治疗方案，多数患者在应用常规化疗方案缓解后的数月或数年内复发，缓解期较短，加大常规

2、化疗药的剂量可以使得部分的病人缓解期延长，但是药物的副作用太大，给患者的身体及心理造成伤害。常规的化疗方法对于晚期T细胞淋巴瘤效果很差，所以寻找理想的化疗方案来提高该疾病的疗效及预后是非常必要的。一种新型蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib，商品名万珂，velcade)的出现使得恶性血液病的治疗充满了希望，作为蛋白酶体抑制剂硼替佐米是第一个被应用于临床的，其独特的抗肿瘤机制使得它在恶性血液病的治疗中受到了很大的重视，据文献报道硼替佐米对于非霍奇金淋巴瘤(NHL)有一定疗效，但是对于硼替佐米与别的传统化疗药的联合应用相关报

3、道较少，此试验中我们将硼替佐米单独或与阿糖胞苷以不同方式联合处理T细胞淋巴瘤Jurkat细胞，目的为研究硼替佐米单独或与阿糖胞苷联合对于Jurkat细胞的增殖及凋亡的影响，并且分析可能的作用机制。从而为T细胞淋巴瘤的治疗寻找理想的化疗方案提供理论依据。方法：l首先我们用MTT比色法分别检测单药硼替佐米或阿糖胞苷对Jurkat淋巴瘤细胞生长的抑制作用，并测出两药48h细胞增殖抑制50％的药物浓度(IC50)。2实验中我们分为六组(1)空白对照组：不加入任何药物；(2)单BTZ组：用30nmol／LBTZ单独处理细胞48h；(3)单

4、药Ara．c组：以0．2ug／mlAra．c单独处理细胞48h；(4)联合用药a组：30nmol／LBTZ和0．2ug／mlAra．c同时处理细胞48h；(5)联合用药b组：0．2ug／mlAra．C预处理细胞6h后再给予30nmol／LBTZ处理细胞共48h；(6)联合用药c中文摘要组：30nmol／LBTZ预处理细胞6h后再给予0．2ug／mlAra．c处理细胞共48h：用同样的方法检测硼替佐米与阿糖胞苷以不同方式联合对Jurkat细胞增殖的抑制作用。3流式细胞分析法分别检测硼替佐米和阿糖胞苷单药及两药以不同方式联合对Jur

5、kat淋巴瘤细胞凋亡的影响；4RT-PCR检测硼替佐米与阿糖胞苷以不同方式联合作用于Jurkat细胞后NF■①活性的改变；硼替佐米或阿糖胞苷单独作用于Jurkat细胞后NF■④活性的改变。5统计学处理。结果：’1单药硼替佐米或阿糖胞苷作用于Jurkat细胞可以抑制其增殖并促进其凋亡，呈时间和剂量的依赖性(Fig．1，Fig．2，Table1，Table2’)。2硼替佐米作用于Jurkat细胞48h细胞增殖抑制50％的药物浓度(IC50)是51．001nmol／L(Table8)。阿糖胞苷作用于Jurkat细胞48h细胞增殖抑制5

6、0％的药物浓度(IC50)是1．183ug／ml(Table8)。3硼替佐米与阿糖胞苷以不同给药顺序联合对Jurkat细胞生长抑制的影响我们选用浓度为30nmol／L(低于48h的IC50)I约硼替佐米和浓度为0．2ug／ml(低于48h的IC50)的阿糖胞苷以不同给药顺序联合作用于Jurkat细胞48h，实验中我们分为六组(1)空白对照组：不加入任何药物；(2)单BTZ组：用30nmol／LBTZ单独处理细胞48h；(3)单药Ara．c组：以0．2ug／mlAra．C单独处理细胞48h；(4)联合用药a组：30nmol／LBT

7、Z和0．2ug／mlAra．C同时处理细胞48h；(5)联合用药b组：0．2ug／mlAra．c预处理细胞6h后再给予30nmol／LBTZ处理细胞共48h；(6)联合用药c组：30nmol／LBTZ预处理细胞6h后再给予0．2ug／mlAra．c处理细胞共48h；各组的抑制率分别为(2士1)％、(44．95+4．9)％、(42．09-J：2)％、(64．98+4)％、(87．69士2)％、(55．44+5)％，可见三种联合用药方式对细胞生长抑制率均高于单药组，尤以联合用药b组对细胞生长的抑制率最高(table．3．Fig．3)

8、。4流式细胞仪检测结果显示单药硼替佐米或阿糖胞苷均可呈时间剂量依赖性地诱导Jurkat细胞凋亡(Fig．6，Fig．7)。流式细胞术检测结果显示：空白对照组、BTZ组、Ara-c组、联合用药a组、联合用药b组、联合用药C中文摘要组的凋亡率分别为(4．2士3)％、