苦豆籽粕-两歧双歧杆菌-唾液乳杆菌合生元微胶囊的研制

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1、分类号S852.7学校代码10129UDC619学号2009201100苦豆籽粕-两歧双歧杆菌-唾液乳杆菌合生元微胶囊的研制Developmentoffoxtail-likesopharaseed’sdregs-Bifidobacteriumbifidum–lactobacillussalivariussynbioticsmicrocapsule申请人：倪敬轩学科门类：农学学科专业：临床兽医学研究方向：中药药理与免疫学指导教师：杨英教授论文提交日期：二〇一二年六月摘要为了研发安全、高效、绿色的合生元用于仔猪早期断奶应激综合

2、征的防控，本试验以抑制仔猪致病性大肠杆菌效果优异的猪源唾液乳杆菌(Lactobacillussalivarius)、两歧双歧杆菌(Bifidobacteriumbifidum)为益生菌和苦豆籽粕为益生素，通过海藻酸钠-壳聚糖包被技术将其制成合生元微胶囊进行了一系列探讨。试验分4步进行：1.抑制仔猪致病性大肠杆菌效果优异菌株的分离。采集不同日龄的健康仔猪新鲜粪便，经过分离、纯化和牛津杯法筛选得到抑制仔猪致病性大肠杆菌效果优异的菌株。2.筛选菌株特性研究。分离菌株利用生化鉴定和16SrDNA序列同源性分析进行菌株鉴定，然后进行

3、生物学特性试验研究，最后与文献中报道的抑制致病性大肠杆菌优良的一株猪直肠分离的嗜酸乳杆菌标准菌株进行抑菌对比。3.合生元微胶囊配方的确立。通过试验寻找合生元微胶囊制作的益生菌、益生素比例及保护剂、氯化钙、壁材浓度。4.合生元的制作。采用3种制作工艺制备苦豆籽粕-两歧双歧杆菌-唾液乳杆菌合生元微胶囊，并进行贮存稳定性等内容的比较研究。结果显示：1.在TPY和MRS培养基厌氧条件下从健康仔猪新鲜粪便中分离得到了35株疑似##乳酸菌，在此基础上利用牛津杯法从中又筛选出抑菌效果最好的11和14菌株。##2.11和14菌株，经生化鉴

4、定和分子生物学鉴定，符合唾液乳杆菌的特性。综合##牛津杯法和生物学特性试验，最终选择14菌株用于制备合生元。14菌株抑菌效果远远强于文献中报道的抑制致病性大肠杆菌优良的一株猪直肠分离的嗜酸乳杆菌标准菌株。3.通过对几种常用微胶囊化方法筛选表明，挤压法包被两歧双歧杆菌和唾液乳杆菌效果较好。其最佳配方为：菌（唾液乳杆菌与两歧双歧杆菌的活菌比例为10:1）胶比为2：1；4％脱脂乳、1％L-谷氨酸钠溶液、2％海藻酸钠、0.5％壳聚糖、2.5％CaCl2和6％苦豆籽粕。984.工艺1和工艺3制备的产品活菌数分别达到1.1×10Cfu

5、/g和2.0×10Cfu/g，87人工胃液和人工肠液处理后的活菌数分别为2.5×10Cfu/g和4.3×10Cfu/g，常78温保存90d后活菌数分别为3.7×10Cfu/g和1.6×10/g。由此可见，工艺1和工艺3制备的苦豆籽粕-两歧双歧杆菌-唾液乳杆菌合生元微胶囊活菌数高，便于常温贮存，保质期长，而且具有耐胃酸性、肠溶胃不溶的特性。结论：##1.从健康仔猪新鲜粪便中分离得到抑制致病性大肠杆菌效果最好的11和14菌株，经试验鉴定均为唾液乳杆菌。2.采用挤压法制备的合生元微胶囊的最佳配方为：菌（唾液乳杆菌与两歧双歧杆菌的

6、活菌比例为10:1）胶比为2：1；4％脱脂乳、1％L-谷氨酸钠溶液、2％海藻酸钠、0.5％壳聚糖、2.5％CaCl2和6％苦豆籽粕。3.工艺1和工艺3制备的苦豆籽粕-两歧双歧杆菌-唾液乳杆菌合生元微胶囊生产工艺简捷，性能稳定，在工业化生产，商品运输、贮藏和临床应用等诸多方面具备一定的优势。关键词：苦豆籽粕；两歧双歧杆菌；猪源唾液乳杆菌；合生元微胶囊；仔猪早期断奶Developmentoffoxtail-likesopharaseed’sdregs-Bifidobacteriumbifidum–lactobacillussa

7、livariussynbioticsmicrocapsuleAbstractInordertodevelopasafe,higheffectiveandgreentypesynbioticsmicrocapsule,whichcanbeusedforpreventingEarlyWeanlingStressSyndromeofPiglets.LactobacillussalivariusandBifidobacteriumbifidum,whichcanbothinhibitpigletpathogenicEscheric

8、hiacoli,wereusedasprobiotics.While,foxtail-likesopharaseed’sdregswasusedasprebiotics.Inthisstudy,wediscussedthefabricationprocessofsynbioticsmicrocapsul