马钱子—苏木与马钱子—白术配伍减毒增效及治疗痹证机理的研究

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1、提要目的：在中医药理论指导下，以临床应用为依据，对古今医家应用马钱子配伍减毒增效的相关文献进行系统梳理，通过对马钱子-苏木、马钱子-白术（以下简称马苏、马术）不同配比毒性、镇痛、抗炎作用的实验研究，观察配伍后的减毒增效作用，寻求最佳配比，并分别从抗自由基损伤、细胞因子和细胞凋亡三方面，探求其镇痛、抗炎免疫和细胞凋亡的机理；从气味配伍理论方面，阐释马苏、马术配伍后减毒增效的理论意义及治疗痹证的配伍意义，为临床应用马钱子治疗RA提供科学依据。方法：1.采用高效液相色谱法（HPLC），测定马苏、马术不同

2、配比煎剂在配伍后马钱子碱和士的宁含量的变化；通过急性毒性实验，观察小鼠死亡状态、记录死亡数量，采用Bliss法计算半数致死量（LD50），分析不同配比毒性强弱的变化，并寻求减毒最佳配比。2.通过小鼠热板法和扭体法，分别测定给药后小鼠舔足潜伏期和15min内扭体总数，并计算不同配比煎剂对扭体反应的抑制率，观察对小鼠镇痛作用的影响，寻求镇痛最佳配比。3.建立佐剂关节炎大鼠模型，用千分尺测定大鼠足跖肿胀程度；计算免疫器官系数；测定佐剂关节炎（AA）大鼠血清中NO、SOD、MDA含量。采用酶联免疫吸附法（

3、Elisa）测定AA大鼠血清中IL-1、IL-6、IL-10、TNF-α、CRP、CIC、滑膜中PGE2、Cor的含量变化；采用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)，观察滑膜组织IL-1β、IL-10、TNF-αmRNA的表达，探讨不同配比镇痛和免疫的机理，寻求最佳配比；采用Elisa法测定AA大鼠滑膜中Fas、Bcl-2的含量，通过免疫组化法（IHC）观察滑膜中Fas的表达情况，初步观察不同配比抗细胞凋亡的机理。4.采用HE染色，观察大鼠肝、肾、脑组织病理变化，对比分析不同配比对各组织的长期毒

4、性影响；观察滑膜组织病理变化，分析给药后抗炎疗效。结果：1.通过HPLC测定，与马钱子单煎剂比较，马苏1:2、1:4、1:6煎剂马钱子碱含量分别降低68.8%、76.8%、99.3%，士的宁含量分别降低56.8%、66.9%、93.6%；马术1:2、1:4、1:6煎剂中马钱子碱分别升高17.6%，降低23.5%、29.0%，士的宁含量分别升高60.7%、降低8.51%、16.6%。2.马苏、马术对小鼠急性毒性的影响通过计算马钱子单煎剂、马苏1:2、1:4、1:6和马术1:2、1:4、1:6煎剂组的

5、LD50分别为605.92、827.21、1084.7、1479.4、401.64、664.1、953.79mg/kg。3.马苏、马术对小鼠镇痛作用的影响热板法：马苏1:4、1:6和马术1:6煎剂组在给药后能提高小鼠痛阈值，延长疼痛反应时间（P<0.01或P<0.05），其中以马苏、马术1:6煎剂组效果较好。扭体法：马术1:6煎剂组对小鼠扭体次数的抑制作用明显强于马钱子单煎剂组（P<0.05），扭体抑制率为26.75%，效果较佳，其余各组无明显变化。4.马苏、马术对AA大鼠抗炎作用的影响原发性足跖

6、肿胀：在治疗过程中马钱子单煎剂、马苏1:4、1:6和马术1:6煎剂组能明显减轻大鼠足跖肿胀程度，抗炎效果较为明显（P<0.01或P<0.05）。继发性足跖肿胀：各配伍组给药后足跖肿胀明显减轻，马苏1:4、1:6和马术1:6煎剂组抗炎效果较为突出（P<0.01或P<0.05），较佳配比为马苏1:6、马术1:6。5.马苏、马术对AA大鼠免疫器官系数的影响马钱子单煎剂组、马苏1:4、1:6和马术1:2、1:4、1:6煎剂组可使胸腺系数减小（P<0.01或P<0.05）。马钱子单煎剂组、马苏1:2、1:4

7、和马术1:6煎剂组大鼠脾系数明显降低（P<0.05或P<0.01）。6.马苏、马术对AA大鼠血清NO、SOD、MDA的影响马苏1:6煎剂组能降低大鼠血清中NO含量（P<0.05）；马钱子单煎剂组、马苏1:2、1:4、1:6和马术1:2、1:4、1:6煎剂组可提高SOD的含量（P<0.05或P<0.01）；马苏1:4、1:6和马术1:2、1:4、1:6煎剂组能明显降低MDA含量（P<0.01）。7.马苏、马术对AA大鼠细胞因子的影响给药后，马苏1:2煎剂组中IL-1β、CRP的含量有所降低（P<0.

8、01或P<0.05），马苏1:4煎剂组中IL-1β、TNF-α、CRP含量降低明显（P<0.01或P<0.05），马苏1:6煎剂组中IL-1β、TNF-α、IL-6、CIC、CRP含量降低明显（P<0.01或P<0.05）；给药后，马术1:2煎剂组中IL-6、IL-10、CRP的含量有所降低（P<0.01或P<0.05），马术1:4煎剂组中IL-1β、IL-6、IL-10、CRP、CIC、Cor含量降低明显；马术1:6煎剂组中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10、CRP、C