rg1联合人脐血干细胞移植治疗对放射损伤scid小鼠造血功能恢复的影响

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1、遵义医学院硕士学位论文Rg1联合人脐血干细胞移植治疗对放射损伤SCID小鼠造血功能恢复的影响姓名：姚观平申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：余丽梅201205遵义医学院硕士学位论文I沁l联合人脐血干细胞移植治疗对放射损伤SCID小鼠造血功能恢复的影响Rgl联合人脐血干细胞移植治疗对放射损伤SCID小鼠造血功能恢复的影响l中文摘要目的：观察人参皂苷R91(ginsenosidesR91，R91)联合人脐带血单个核细胞(humanumbilicalcordbloodmonouclearcells，hUCB—MNCs)移植治疗对放射损伤SCID小鼠造血功能恢复的影响。方法：密度梯度离心法分离hU

2、CB．MNCs，流式细胞术检测MNCs及造血干细胞(haemopoieticstemcell，HSCs)含量。亚致死量X线照射制备严重放射性损伤SCID小鼠模型，尾静脉注射移植，全自动全血细胞分析仪检测血象，流式细胞术检测骨髓(bonemarrow,BM)和外周血(peripheralblood，PB)中各细胞亚群变化情况，荧光光度法测定细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)，荧光显微镜下观察抗人细胞核抗体．FITC标记的hUCB-MNCs在骨髓组织的定植、分布情况。结果：每份脐带血所获得MNCs数量为(8．62士5．45)×107个细胞，hUCB—MNC中CD34+细胞含量为O．65～2．4

3、8％。医用直线加速器亚致死量X线照射后，SCID小鼠股骨骨髓组织切片HE染色结果显示，骨髓组织结构破坏明显，有核细胞数显著降低，小鼠一般状况差，模型组和钙敏感受体阻断剂CdCl2组小鼠，1周内全部死亡。hUCB。MNC移植后，PB血象检测结果显示，血小板数在放射损伤第14d降至最低，21d开始缓慢恢复；中性粒细胞则于第7d降至最低，低水平持续至14d，21d才开始缓慢恢复，白细胞、淋巴细胞、单核细胞均在第7d降至最低，14d已开始明显恢复，中性粒细胞、白细胞和淋巴细胞在第28d，一过性恢复至照射前水平后明显降低到照射前水平以下。PB红细胞在第7d出现短暂下降后，很快又恢复至正常水平；而中性粒细

4、胞、血小板、白细胞、淋巴细胞和单核细胞5种血细胞至第35d仍未恢复到照射损伤前水平。与模型组比较，hUCB．MNCs移植组BM和PB中Lin-Sca．1+C．kit+细胞和CDl33+flk．1+细胞千分率明显升高，CDIIb+、Gr-I+细胞百分率也明显增高。在hUCB-MNCs移植基础上Rgl治疗后，尤其是Rgl高剂量组，放射损伤小鼠中性粒细胞、血小板和白细胞均于细胞移植后第28d恢复至空白组正常水平，白细胞、淋巴课题来源：国家自然科学基金批准号30860388。6遵义医学院硕士学位论文Rgl联合人脐血干细胞移植治疗对放射损伤SCID小鼠造血功能恢复的影响细胞于第14d、第21d开始恢复；

5、与MNCs组比较，Rgl治疗组上述细胞的下降较少，且中性粒细胞和血小板恢复较好，恢复时间也明显提前，骨髓有核细胞的数量增加也较明显，所有实验动物存活良好。BM中LSK细胞和PB中CDl33+flk．1+细胞千分率明显高于MNCs组和空白组；Rgl治疗组BM中CDllb+细胞百分率较模型组高，Gr-l+细胞百分率也高于模型组和MNCs组，Ter．119+细胞则以模型组最高，Rgl治疗组也高于MNCs组。CaSR激动剂对PB血象、BM及PB的LSK细胞和CDl33+flk．1+细胞千分率的影响与R91高剂量组相似。体外给予Rgl0．1～3lamol／L，可浓度依赖性的增加hUCB．MNCs移植后小

6、鼠骨髓有核细胞内游离钙水平。hUCB．MNCs移植4w，荧光显微镜下检查发现，抗人细胞核抗体MABl281．FITC标记的细胞散在分布于小鼠骨髓组织中，除R91低剂量组分布数量相对较少外，MNCs组、Rgl和GdCl3组间抗人细胞核抗体。FITC标记细胞的分布和数量未见明显差异。结论：Rgl明显促进hUCB．MNCs移植治疗放射损伤SCID小鼠造血功能的恢复，明显缩短中性粒细胞和血小板等血细胞恢复正常水平的时间，且作用与CaSR激动剂GdCl3相似，其作用机制可能与增加小鼠骨髓有核细胞内游离钙水平、提高BM和PB中HSCs和EPCs的比例有关。关键词：人参皂苷I沁1；SCID小鼠；造血干细胞；

7、内皮祖细胞；钙敏感受体；骨髓；外周血遵义医学院硕士学位论文R91联合人脐血干细胞移植治疗对放射损伤SCID小鼠造血功能恢复的影响EffectsofRglwithhumancordbloodstemcellstransplantationonhematopoiesisfunctionrecoveryinradiationdamagedSCIDmiceAbstractObjectiveTostudyt