佛波酯增强肺腺癌细胞株顺铂敏感性的研究

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEnhancementofCisplatinSensitibityofHumanLungAdenocarcinomacellsbyPhorbolEsterByLeiFanSupervisor：AssociateProf．YuzhongGuoProf．ZhengtaoHanPharmacologyBasicMedicalCollegeMay2012原创性声明l

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3、flIIrrIIllllfllfJllY2102850本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务，作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复

4、印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文或汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日中文摘要佛波酯增强肺腺癌细胞株顺铂敏感性的研究研究生范磊‘导师郭玉忠1副教授韩正涛2研究员l郑州大学基础医学院临床药理学教研室2河南省肿瘤医院河南郑州450052摘要背景与目的肺癌是我国常见的恶性

5、肿瘤之一，它的发病率和死亡率己跃居各种恶性肿瘤的首位，目前含铂的化疗方案己被公认为是肺癌化疗的一线方案。然而在临床上，多数患者经初次化疗后，甚至有部分患者在第一次化疗时，肺癌细胞就对顺铂产生了耐药性，影响了治疗效果，导致化疗失败。如何逆转肿瘤的多药耐药、增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，提高化疗的效果是l临床上亟待解决的问题。12．氧．十四烷酰佛波醇．13．乙酸酯(12．O．tetradecanoylphorb01．13．acetate，TPA)是佛波酯类化合物中活性较高的一种，是蛋白激酶C(proteinki

6、naseC，PKC)的高亲和力物质。TPA通过激活PKC可以产生多种生物学效应，比如刺激或抑制细胞增殖和诱导分化、激活核转录因子及细胞表面受体、肿瘤促发等。已有研究表明TPA能够促进肺癌细胞的分化而降低其恶性程度，还能增强肿瘤细胞对顺铂的敏感性，如在人宫颈癌细胞、卵巢癌细胞等，而在肺腺癌细胞尚无报道。本课题拟采用体外培养A549及其耐顺铂细胞株A549／CP为研究对象，探讨TPA能否增强肺腺癌细胞对顺铂的敏感性，并对其作用机制进一步研究，为临床肺癌的治疗寻找新的途径和方法提供实验基础。中文摘要方法l细胞培养人

7、肺腺癌细胞株A549用含10％胎牛血清的高糖DMEM培养基在37℃温度，5％C02饱和湿度的无菌培养箱中进行常规培养，每天观察一次视情况传代，平均每三天传代一次。A549／CP细胞在培养基中加入2gg／ml的顺铂，其它培养条件同A549细胞。2TPA单用及联合顺铂对肿瘤细胞的增殖的影响采用MTTEL色法检测两药单用及联合对肿瘤细胞增殖抑制的变化，绘制量效曲线，并进行统计学分析，评价TPA对顺铂抗肿瘤作用的影响。3TPA对肿瘤细胞内铂离子浓度的影响用无焰原子吸收法检测肿瘤细胞内铂离子浓度的变化。4TPA对细胞N

8、a+，K+．ATP酶活性及其亚基表达水平的影响分别以Na+，K+．ATP酶活性检测试剂盒和WesternBlotting法检i贝{]TPA对两种细胞株Na+，K+．ATP酶活性和Na+，K+．ATP酶亚基表达水平的影响。结果1TPA对细胞增殖的影响TPA在1．6nM和8．1nM的浓度TPA对细胞增殖无抑制作用，而16．2nM及其以上浓度TPA对细胞有明显增殖抑制作用，呈剂量依赖性。2TPA增强细胞对顺铂敏感性A549细胞，药物作用24小时CP单用组分别与1．6nMTPA联合组、8．1nMTPA联合组相比IC5

9、0分别下降62％和69％(尸≮O．01，与CP组比较)，增敏倍数分别为2．6、3．2；药物作用48小时CP单用组分别与1．6nMTPA联合组、8．1nMTPA联合组相比IC51D分别下降67％和68％(尸≮0．01，与CP组比较)，增敏倍数分别为3．0、3．1；药物作用72d*时CP单用组分别与1．6nMTPA联合组、8．1nMTPA联合组相比IC50分别下降55％和63％衅O．01，与CP组比较)