肝癌发生中mef2对hdacs的调控及hdaci丙戊酸联合顺铂对肝癌细胞的增殖抑制研究

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1、浙江大学硕士学位论文肝癌发生中MEF2对HDACs的调控及HDACI丙戊酸联合顺铂对肝癌细胞的增殖抑制研究姓名：曹恒斌申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：申屠建中20120224浙江大学硕上论文摘要肝癌发生中MEF2对HDACs的调控及HDACI丙戊酸联合顺铂对肝癌细胞的增殖抑制研究浙江大学药学院同等学力硕士研究生指导教师摘要药理学曹恒斌申屠建中教授研究目的本研究应用实时荧光定量PCR(Real．timePCR)法测定大鼠在诱导肝癌发生发展过程中，肝脏组织中MEF2舭c及HDAC4／10的mRNA表达水平，考察MEF2A／2C-与HDAC4／1

2、0mRNA表达的相关性。然后通过MTT法探讨丙戊酸(VPA)联合顺铂(DDP)对人肝癌细胞HepG2、BEL7404、SMMC7721的增殖抑制作用。通过计算联合用药的抑制率，进一步评价两药物对肝癌细胞是否具有协同作用。材料与方法采用O．01％二乙基亚硝胺饲喂Wistar大鼠，建立大鼠肝癌模型，分别于4、8、12、16、18周后断颈处死，每批8．10只；空白组为10只，给纯净水自由饮用，按相同时问处死，每批2只，取肝脏标本，保存于．80。C冰箱。提取大鼠肝组织中的总RNA并逆转录为cDNA，应用Real．timePCR检测组织中MEF2A／2C与H

3、DAC4／10mRNA表达量。然后采用三组不同浓度的VPA与三组不同浓度的DDP及九组联合用药组作用于人肝癌细胞HepG2、BEL7404、SMMC7721，24、48、72h后，观察细胞数量和形态的变化，用MTT法分析药物对细胞增殖的抑制率(IR)，计算联合用药对细胞增殖抑制率q值，考察联合使用是否为协同作用。V浙江大学硕士论文摘要结果18周以后，大鼠致癌率为100％，总死亡率为35％，MEF2A／2CmRNA在第4、8周的样本中表达量大量增加(P<0．01)，HDAC4／10mRNA在第4周的样本中也大量表达(P

4、水平．但两者的mRNA表达水平在时间上不存在相关性。72h后，各用药组细胞数目减少十分明显，其中VPA+DDP组较单独用药组减少更为显著，其细胞形态发生较大改变。采用MTT比色法显示，对照组细胞生长率明显高于各实验组，联合用药组对细胞增殖的抑制率(1R)更为显著，且随着药物浓度增加及作用时间延长，各组对细胞增殖IR明显增加。根据q值结果，在VPA较高浓度(>_1001xg·ml以)时联合用药组具有明显的协同作用。结论，在大鼠肝癌诱导发生过程中，MEF2与HDACs的mRNA表达量增加，MEF2与肝组蛋白去乙酰化有关。但MEF2与HDACs的mRNA

5、表达量在时间上关联性不是非常明确。VPA能增强DDP对人肝癌细胞的增殖抑制作用，并且与药物浓度及作用时间呈依赖趋势，在VPA较高浓度(>100I_tg·ml‘1)时，两药联合使用具有协同优势。【关键词l：肝癌；MEF2；HDACs；丙戊酸；肝癌细胞；MTT；抑制率；协同作用VI浙江大学硕士论文摘要RegulationofMEF2toHDACsintheprogressoflivercancerandtheinhibitoryeffectofHDACIVPAcombinedwithCisplatinonproliferationinHepatomac

6、ellsAbstractCollegeofPharmacyZhejiangUniversityPharmacologyPost-graduateHengbinCAOSupervisorProfessorShentuJIANZHONGobjectiveWehaveexploredthecorrelationbetweenMEF2andIIHDACsbydetectingtheexpressionlevelofMEF2A／2CandHDAC4／10inrathepatocellularcarcinomausingreal-timefluorescenc

7、equantitativePCRandinvestigatedtheinhibitoryeffectofValproateacid(VPA)combined、析mCisplatinonproliferationinHepG2cell，BEL7404cellandSMMC772lcell．MethodsRatlivercancerwasinducedbyfeedingvvitlldiethylinitrosamine(DEN)．ThetotalRNAisolatedfromratlivertissuewasreverselytranscribedin

8、tocDN久andreal-timefluorescencequantitativePCR(Q·PCR)methodwas